黄芪多糖对衰老模型大鼠肝细胞色素C氧化酶Ⅰ、Ⅳ表达的影响

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1、黄芪多糖对衰老模型大鼠肝细胞色素C氧化酶Ⅰ、Ⅳ表达的影响作者：周逢芳魏晓东欧芹梁启超【摘要】目的研究黄芪多糖对衰老模型大鼠肝细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)、COⅣ表达的影响及其作用机制。方法测定各组大鼠肝线粒体锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、CO活性及丙二醛(MDA)含量，采用RTPCR法检测COⅠ、COⅣ、核呼吸因子1(NRF1)和线粒体转录因子(mtTFA)mRNA的表达水平。结果黄芪多糖可提高模型大鼠肝MnSOD、CO活性(P<0.01，P<0.05)，降低MDA含量(P<0.01，P

2、<0.05)和COⅠ、COⅣ、mtTFA和NRF1mRNA的表达(P<0.01)。NRF1和COⅣ表达，mtTFA和COⅠ表达，NRF1和mtTFA表达，分别呈显著正相关。结论黄芪多糖可下调mtTFA和NRF1的表达，且对COI、COⅣmRNA表达的影响与mtTFA和NRF1有密切相关。【关键词】细胞色素C氧化酶;核呼吸因子1;线粒体转录因子;黄芪多糖7个体衰老的一个主要表现是能量代谢异常。细胞色素C氧化酶(CO)是呼吸链末端的限速酶，由于在能量产生和调节中的重要地位，使之成为研究的理想靶标。

3、CO各亚基的正确表达及匹配对CO活性起到重要作用,且CO的表达还受到线粒体转录因子(mtTFA)、核呼吸因子(NRF1)等相关因子的调控。国内外研究都证实衰老状态下CO活性降低，但对CO亚基表达变化的研究不尽一致〔1，2〕。已有报道黄芪具有抗衰老作用〔3〕，但从CO亚基水平研究还未见报道，因此本实验旨在研究黄芪多糖提高CO活性的分子生物学机制。　　1材料与方法　　1.1材料健康Wistar系大鼠40只，雌雄各半，体重120～250g。黄芪多糖的提取和鉴定〔4〕。　　1.2动物分组及处理按体重随机分为4组：对照组、

4、模型组、30d和45d给药组。采用D半乳糖法制作衰老模型，造模成功后,给药组开始灌服黄芪多糖，剂量为200mg/kg,分别给药30，45d。45d后，一同处死4组大鼠，取肝组织，部分用于肝线粒体的制备，测定锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、CO的活性和丙二醛(MDA)含量，另部分用于提取组织RNA。　　1.3指标测定　　1.3.1MnSOD、MDA及CO的检测Mn7SOD活性采用黄嘌呤氧化酶法测定，MDA含量采用TBA化学比色法测定，CO活性采用酶的假一级反应初速度测定。　　1.3.2肝总RNA提取及逆转录用

5、上海生工的总RNA提取试剂盒，RNA逆转录采用南京凯基RTPCR试剂盒，cDNA在-20℃保存待用。　　1.3.3RTPCR引物COⅠ、COⅣ、mtTFA、NRF1、βactin引物序列用Prime软件进行设计,并由上海生工合成，见表1。表1引物序列　　1.3.4PCRPCR反应在50μl体系:35.5μl灭菌双蒸水,5μl10×Taq缓冲液，1μldNTPs,1μl引物I，1μl引物Ⅱ，2μlcDNA模板，0.5μlTaqDNA聚合酶,4μlMgCl2。94℃预变性5min，94℃变性30s,55℃退火4

6、0s，72℃延伸1min，72℃延伸10min，扩增25～30个循环。　　1.3.5电泳RTPCR反应产物取RTPCR反应产物5μl及制备1.5%琼脂糖凝胶，120V稳压，电泳40min，经凝胶成像分析系统进行分析，用目的片段(光密度)/βactin(光密度)来分别代表各产物的相对含量。　　1.4统计学处理所有数据均以x±s表示，实验结果采用SPSS13.0统计软件处理，组间比较采用q检验。　　2结果7　　2.1黄芪多糖对衰老模型大鼠肝线粒体MnSOD、CO活性和MDA含量的影响由表2可见，与对照组比较，模

7、型组MnSOD和CO活性下降，MDA含量升高(P<0.01)。与模型组比较，给药组MnSOD、CO活性上升，MDA含量下降(P<0.01，P<0.05)，但与对照组比较仍有显著差异(P<0.01)，两给药组比较无显著差异。　　2.2黄芪多糖对衰老模型大鼠肝COⅠ、COⅣ、mtTFA、NRF1mRNA水平影响由表3，图1可见，与对照组相比，模型组COⅠ、COⅣ、mtTFA和NRF1mRNA水平显著升高(P<0.01)。给药组与模型组比较，COⅠ、COⅣ、mtTFA和NRF1mRN

8、A水表2黄芪多糖对衰老模型大鼠肝线粒体SOD、CO和MDA含量的影响与对照组比较：1)P<0.01，2)P<0.05;与模型组比较：3)P<0.01，4)P<0.05;下表同表3黄芪多糖对衰老模型大鼠肝COⅠ、COⅣ、mtTFA、NRF1mRNA水平影响平含量明显降低(P<0.01)，但与对照组仍有显著差异(P<0.01