组蛋白去乙酰化酶和转录因子Aiolos调节免疫球蛋白产生的机制

《组蛋白去乙酰化酶和转录因子Aiolos调节免疫球蛋白产生的机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、上海第二医科大学博士学位论文组蛋白去乙酰化酶和转录因子Aiolos调节免疫球蛋白产生的机制姓名：卢中平申请学位级别：博士专业：麻醉学指导教师：江伟20050401学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。作者签名：日期学位论文使用授权声明本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交

2、论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名：导师签名日期上海第二医科大学博士学位论文中文摘要组蛋白去乙酰化酶和转录因子Aiolos调节免疫球蛋白产生的机制博士研究生：卢中平导师：江伟中文摘要免疫球蛋向Ig的产生丰要包含三个过程，即骨髓中B细胞的V(D)J重排(VDJrearrangement)，和外周淋巴器官巾B细l胞的体组lI胞高频突变(SHM，somatichype

3、r01utation)以及类别转换(CSR，classswitchrecombination)。前两个过程主要与Ig可变区(Vregion)抗体的多样性和亲和力成熟有关，而CSR则主要形成Ig恒定区(Cregion)抗体同类型(isotype)而在机体发挥功能。Tg产生的过程极其复杂且有许多不明之处。大量疾病与抗体的异常产生和异常抗体的产生有关，因此加强对Ig产生及其调节的理解，能进一步加深对这些疾病的认i：}{，为治疗提供新的思路。在细胞核中，DNA缠绕在组蛋白octamer位点形成核小体。组蛋白修饰如乙酰化和甲基化在基因激活或沉默中发挥重要的

4、作川。最近认为IgH类别转换区和可变区的组蛋白乙酰化分别与CSR和SHM相关。而组蛋白乙酰化对VDJ重排的调节被认为是以增强予依赖的方式，通过修饰目标结合位点使其易于与重组激活蛋向结合而发挥作用的。这些结果进一步增强了对抗体基因装配的分子机制的理解。抗DNA自身抗体的产生导致系统性A身免疫，并且是鼠和人红斑狼疮的一个特征。至今仍不清楚组蛋白去乙酰化酶HDACs在抗DNA自身抗体产生中是否发挥作用。转录凶子Aiolos是淋巴系统特有的一种重要锌指调控蛋白，参与淋巴细胞的发育、染色质重塑及抑制自身抗体的产生。本课题组已发表的研究丁作发现缺失Aiolo

5、s基因导致小鼠眦清-

6、1lgE明显增高，提示转录因子Aiolos足一种IgE产生的负调因子。已有文献报道Aiolos和lkaros以异二聚休的形式通过招募HDAC抑制转录而负调基因表达。因此假设Aiolos是否通过抑制lgECSR过程上海第二正辞夫学{莓奄学往论文中支箍要而对IgE产生负调作用。本课题从组蛋囊乙醮化秘转录因子Aiolos两方面探讨lg的调节机制。一．HDAC对自身抗体产生和免疫球蛋白基因转录的影响为了观察HDACs对自身抗体产生的作用，运用4i圊浓度HDACs特冥抑制裁TSA经理T347细魏。绣采显示TSA箍登蕊降低T347分泌I

7、gG2a抗被链DNA抗体。并且呈剂量依赖性降低。TSA100ng／ml处理12和24小时分别引起27和3．6偿的降低。同时流式细胞仪鼹示TSA能诱导T347身l{臌壁蠢H量依赖毂的凋亡，TSA50ng／ml处理12，j、对耗诱鼯94％豹T347细邈凋亡。我们又餍对TSA诱导凋亡不敏感的T347细胞株来观察TSA对自身抗体产，卜的影响，结粜在不显著诱导细胞碉f：憋情况下，TSA网样能显著抑制自身抗体的产‘芒。这些结果显示TSA能遥过诱导细稳凋亡或不依赖凋亡静方式来，撺剜自努抗体静产熏。为了了解}∞AC活性的抑制是否影响免疫球蛋白基闵的转录，我们观察

8、了经TSA处理后鳇T347细胞v2a转录体表达。终聚显示，缀TSA处理6，

9、、时最，疆系(germline)和裘尉转换焉(post．switch)72a转录体被强烈捧铷。在弼TSA处理的MRL—lpr小鼠脾脏B细胞中，胚系3'1、72a、Il和转换后7l、y2a转录体都被显藩抑制。这贱结果显示撺铡HDAC瀵髅能摊制lgH蕊爨转录。lgH转录与IgH启动予(promoter)和增强子(enhancer)的调节密切翮关。因此我们观察丁TSA对紧接S“。L游的『exorl5’端扁动予IP、Jfl和s“间的内含子区增强子E#以及3"-lgH增强予活性的影

10、响。憋含lP穗动子痔箩硅、囊动予缝合E“和痘动子结合lgH3’端增强予元件(3A1,23B4)的三种荧光豢酶报告基因质粒Vl{Luc、V