红花注射液复合黄芪注射液对大鼠肠缺血再灌注损伤的实验研究

红花注射液复合黄芪注射液对大鼠肠缺血再灌注损伤的实验研究

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时间:2019-05-11

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1、红花注射液复合黄芪注射液对大鼠肠缺血再灌注损伤的实验研究作者:高永刚,王宏磊,武继军【摘要】目的观察红花注射液复合黄芪注射液对肠缺血再灌注损伤肠黏膜保护效应。方法采用肠系膜上动脉(SMA)夹闭45min后松夹方法制备肠缺血再灌注损伤动物模型。将Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯肠缺血再灌注组及红花注射液复合黄芪注射液治疗组(注射液治疗组,以下同)。假手术组分离SMA但不夹闭,45min后取血并活杀动物;其余两组分别松夹形成血流再灌注,缺血再灌注组从尾静脉注射0.15ml生理盐水,注射液治疗组则从尾静脉给予注射液。于再灌注后0.5,0,2,6,12和24h取

2、血检测血浆D乳酸水平;活杀动物后取小肠组织行苏木素伊红(HE)染色,光镜下观察组织病理形态学改变;观察两组大鼠肠缺血再灌注损伤后不同时间点的存活率。结果与单纯肠缺血再灌注组各时间点比较,注射液治疗组动物存活率均高于对照组,以24h最为显著,有统计学意义(P<0.05);血浆D乳酸水平于再灌注后1h则明显低于缺血再灌注组,至24h仍呈降低趋势(P均<0.05);小肠黏膜病理形态学改变较缺血再灌注组轻。结论红花注射液复合黄芪注射液对肠缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与红花和黄芪抗自由基作用有关。【关键词】红花注射液;黄芪注射液;肠缺血再灌注损伤;9

3、D乳酸 在腹部外伤、失血性休克、严重创伤、感染、烧伤等病理状态下,往往存在肠道缺血再灌注损伤和功能障碍,肠屏障功能降低,肠内细菌和毒素通过受损的肠黏膜进入体循环,激活网状内皮系统,引起大量炎症介质和细胞因子释放,造成全身炎症反应综合征(SIRS),甚至发生多器官功能衰竭(MOF)。采取有效措施避免或减少肠道损害有重要作用。本实验中利用大鼠肠系膜上动脉(SMA)夹闭模型,研究全身给予红花注射液复合黄芪注射液对肠道缺血再灌注损伤后肠道的保护作用,探讨其可能的作用机制。  1材料与方法  1.1动物模型制作及分组选择健康的Wistar大鼠(提供)150只,平均体质量

4、(220±20)g,适应性饲养5d,手术前12h禁食,自由饮水。其中78只动物随机分为假手术组(n=6),单纯肠缺血再灌注组(n=36)以及注射液治疗组(n=36)。根据缺血再灌注的时间,又分成0.5,1,2,6,12和24h等6组,每组6只。采用SMA夹闭致缺血45min后松夹复制肠道再灌注模型。经腹腔注射质量分数为3%的戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后,在无菌条件下开腹,钝性分离SMA根部。假手术组仅分离SMA根部但不夹闭;其余动物用微血管夹夹闭SMA根部,完全阻断血流459min,然后松夹,恢复肠道血流形成再灌注。肠缺血再灌注组和注射液治疗组分别于SM

5、A夹闭45min后松夹,即刻从尾静脉注射生理盐水(0.15ml)或红花注射液和黄芪注射液(每只黄芪注射液0.6ml·kg-1合红花注射液1ml·kg-1混匀注射)进行预处理。取静脉血,离心后分离血浆,70℃低温保存待测。按设定时间点活杀动物,取距离回盲部上端10cm以上的肠管,用体积分数为10%的中性甲醛固定,石蜡包埋,4℃保存待用。另72只大鼠予以同等程度肠缺血再灌注损伤处理,观察大鼠存活情况。  1.2观察指标及方法  1.2.1观察肠缺血再灌注损伤后大鼠存活情况72只大鼠予以肠缺血再灌注损伤处理后,于再灌注2,6,12,24和48h各时间点观察大鼠存活情

6、况。  1.2.2血浆D乳酸检测以改良Brandt方法[1]测定血浆D乳酸浓度。  1.2.39肠道组织学检查取经10%中性甲醛固定、石蜡包埋的小肠组织切片,苏木素伊红(HE)染色,光镜下观察小肠组织病理学变化。小肠损伤程度用Haglund等[2]报道的积分法评估。0分为正常绒毛和腺体;1分为部分绒毛顶部上皮轻度受损;2分为上皮下腺体轻度受损;3分为上皮下间隙扩大,毛细血管充血;4分为上皮与固有层中度分离,腺体受损;5分为部分绒毛顶部脱落;6分为绒毛脱落明显,毛细血管扩张;7分为固有层绒毛脱落,腺体受损明显;8分为固有层开始消化分解;9分为出血、溃疡。  1.

7、3统计学方法χ2检验比较注射液治疗组与肠缺血再灌注组间大鼠存活率的变化。血浆D乳酸浓度检测结果及小肠损伤程度积分以±s表示,采用完全随机设计资料方差分析,用q检验,P<0.05表示差异有统计学意义。  2结果  2.1肠缺血再灌注后大鼠存活率结果见表1。注射液治疗组各时间点动物存活率均高于肠缺血再灌注组,其中24h组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。表1注射液对肠道缺血再灌注后大鼠存活率的影响  2.2血浆D乳酸浓度水平变化结果见表2。肠道缺血性损伤可使血浆D乳酸水平明显升高,与缺血前相比,有显著性差异(P<0.01)。肠道缺血再灌注损

8、伤后0.5h时即已出现血浆D乳酸水平明

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