猪链球菌型中国强致病株zyh荚膜缺陷菌株的构建

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1、猪链球菌2型中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷菌株的构建胡丹1,2，王长军2，胡福泉1，王晶2，程功2，李明1，潘秀珍2，唐家琪1,2基金项目：国家”863”项目（NO.2006AA0Z455）,国家自然科学基金资助项目（NO.30600533;NO.30730081;NO.30670105）,江苏省自然科学基金资助项目（NO.BK2006014;NO.2007013）*通讯作者:Tel：025-84526002；E-mail：tjq85@hotmail.com作者简介：胡丹（1982－），女，江西九江人，硕士研究生，主要从事微生物

2、基因组学方面的研究。025-84507094E-mail：hudan1234@163.com（1第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038）（2南京军区军事医学研究所南京210002）摘要目的构建猪链球菌2型（Streptococcussuisserotype2,S.suis2）中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷株，为研究S.suis2毒力因子及致病机制奠定基础。方法利用同源重组基因敲除方法获得S.suis2强毒株05ZYH33荚膜合成基因cps2B敲除突变株，通过小鼠实验证实突变株对细菌毒力的影响。结果PCR和South

3、ern杂交结果均显示cps2B基因完全被壮观霉素抗性基因替代，表明基因敲除突变体构建成功。电镜结果证实突变体荚膜合成能力缺失，小鼠致病性试验结果显示突变体毒力基本丧失。结论结果显示成功构建05ZYH33荚膜缺陷株，研究结果提示菌体荚膜多糖成分对于猪链球菌2型侵袭和致病具有显著作用。关键词:猪链球菌2型；荚膜多糖；基因敲除；致病性实验中图分类号：R378.1＋2文献标识码：ADevelopmentofanonencapsulatedmutantofStreptococcussuisserotype2Chinesehighlyvirul

4、entstrain05ZYH33HUDan1,WANGChang-Jun2，HUFu-Quan1，WANGJing2，CHENGGong2，LIMing1，PANGXiu-Zhen2，TANGJia-Qi1,2(1DepartmentofMicrobiology,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400038)(2InstituteofMilitaryMedicine,Nanjingcommand,Nanjing,210002)Abstract:Weconstructedgenekno

5、ckoutmutantofcps2Bgeneencodingcapsularpolysaccharide（CPS）synthaseinStreptococcussuisserotype2(S.suis2)virulentstrain05ZYH33basedontheprincipleofhomologousrecombination.PCRanalysisandSouthernhybridizationshowedthatcps2Bwasreplacedcompletelybythespcr11cassette,thecps2Bge

6、nedeletionmutantof05ZYH33wassuccessfullyconstructed.Nocapsularmaterialcouldbeobservedonthesurfacesofthemutantstrainbytransmissionelectronmicroscopy.ItissuggestionthatS.suis2mutantislostofabilityincapsulesynthesis.Furthermore,thenonencapsulatedmutantwascompletelyavirule

7、ntinmurinemodelofinfection.TheseobservationsindicatethatthecapsuleofS.suis2playsanessentialroleinthepathogenesisandinvasivenessofS.suis2infection.Keywords:Streptococcussuisserotype2,capsularpolysaccharide,geneknockout，virulenceassay猪链球菌2型（S.suis2）是一种重要的人畜共患病的病原体。迄今为止，S

8、.suis2已在包括欧美、澳大利亚和中国在内的20多个国家和地区引发了人感染的病例。尤为值得关注的是，我国的江苏和四川两省分别在1998和2005年发生两起猪链球菌感染猪和人的公共卫生事件，感染者出现了国内外罕见的链球菌中毒性休克综合