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1、猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析河南农业科学,2011,40(5):152—157JournalofHenanAgriculturalSciences猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析王兴涛,罗俊.,滕蔓,樊剑鸣,鄂巍,禹斌,刘力,张改平(1.西南大学动物科技学院,重庆400716;2.河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;3.郑州大学生物工程系,河南郑州450001;4.荥阳市畜牧局,河南荥阳450100)摘要:利用RT—P
2、CR技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析,从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒(JEV)M基因和E基因具有高度同源性的预期产物.在3日龄乳鼠脑内接种种猪精液上清,10d左右即出现典型神经症状,并且病死鼠脑组织RT—PCR结果均为阳性.用病死鼠脑组织研磨上清接种BHK一21细胞,感染60h后用JEV单抗进行间接免疫荧光鉴定均为阳性,这表明分离毒株均为JEV流行毒株,分别命名为BSF.ZZ一1和BSF.ZZ一3.对新分离毒株进行体外细胞培养,BSF.ZZ一1和BSF.ZZ一3连续传代3次后病毒量均获得明
3、显增加,最高分别可达O?趾TCID5./mL和1O?土.?TCID50/mL.用生物学软件MEGA4.0分别构建JEV基因的系统进化树,发现BSF.ZZ一1和BSF.ZZ一3处于同一进化分支,均属于基因Ⅲ型.关键词:流行性乙型脑炎病毒;分离鉴定;M基因;E基因;系统进化树;基因Ⅲ型中图分类号:$855.3文献标识码:A文章编号:1004～3268(2011)05—0152—06CharacterizationandPhylogeneticAnalysisoftheFieldJapaneseEncephalitisVir
4、usStrainsIsolatedfromSemina1FluidofDiseasedStockBoarsWANGXing—tao,LUOJun,TENGMan,FANJian—ming.,EWei,YUBin,LIULi,ZHANGGai—ping(1.SehoolofAnimalScienceandTechnology,SouthwestUniversity,Chongqing400716,China;2.KeyLaboratoryofAnimalImmunologyoftheMinistryofAgricultu
5、re/HenanProvincialKeyLaboratoryofAnimalImmunology,HenanAcademyofAgriculturalSciences,Zhengzhou450002,China;3.DepartmentofBioengineering,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450001,China;4.LivestockBureauofXingyangCity,Xingyang450100,China)Abstract:Fortheisolationoffield
6、prevalentJapaneseencephalitisvirus(JEV),theseminalfluidsofdiseasedstockboarswerecollectedfromHenanprovince.Usingtwospecificdesignedprimerpairs,bothofJEVMandEgeneswereamplifiedfromboarseminalfluid(BSF)samplesbyre—versetranscriptionpolymerasechainreaction(RT—PCR),
7、whichwasfurtherverifiedbygeneclo—ningandDNAsequencing.Animalexperimentsalsoshowedthattwoofthesupernatantofsemi—halfluidscausedtypica1clinicalnervoussymptomsordeathofsucklingmouseatabout10days收稿Et期:2011—02—20基金项目:国家公益性行业(农业)科研专项(200803015)作者简介:王兴涛(1984一),男,河南原阳人,
8、在读硕士研究生,研究方向:动物流行病学.E—mail:xingtao210@126.com*通讯作者:张改平(1960一),男,河南内黄人,研究员,中国工程院院士,博士,博士生导师,主要从事动物免疫学及重大疫病快速检测技术研究.E—mail:zhanggaiping2O03@yahoo.corn.cn第5期王兴涛等:猪流行性乙型脑
