乙肝表面抗原定量测定地方法学验证

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1、实用标准文案乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证姓名ZP学号0925400072班级09级医学检验本科二班指导老师沈富兵二〇一三年四月文档实用标准文案乙肝表面抗原定量测定的方法学验证作者：ZP（成都医学院检验医学院09级医学检验本科二班，610500）【摘要】 目的用福州蓝图生物工程有限公司出品的乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒对乙肝表面抗原定量测定的方法进行验证，以判断是否能用于教学以及临床分析。方法运用ELLISA法定量测定乙肝表面抗原，应用试剂盒HBsAg标准从浓度为8ng/ml的2倍稀释的6个浓度梯度

2、，根据OD值绘制标准曲线再计算相对回收率和板内和板间精密度，通过资料数据综合分析。结果HBsAg线性较好，其准确度、精密度、LOD值均在正常范内。结论ELISA法定量检测HBsAg能较准确、快速地反映体内乙肝病毒复制情况，可以用于教学以及临床分析。【关键词】 乙肝表面抗原方法学验证标准曲线精密度ELLISA病毒性肝炎中乙型肝炎的危害较大，我国是病毒性乙型肝炎的高发流行区，普通人群的乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染率接近60％，约占世界HBV携带者的1/3。乙型肝炎病毒的病原体不仅具有传染性，还可能

3、导致发展成肝硬化，甚至肝癌，所以乙型肝炎病毒的早期、准确、定量检测对乙型肝炎临床诊断、疗效观察及预防具有重要的意义。酶免分析法HBV—EIA是HBV抗原和抗体最常用的检测技术，其方法简便、价廉，适合一般实验室推广，其中酶联免疫吸附技术(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)目前应用最为广泛，它常用聚苯乙烯为固相载体，使其与待测标本中的相应抗体或抗原结合，然后加酶标记的抗原或抗体，再加底物显色，最后根据色泽深浅来推算待测抗原或抗体的含量。此方法特异性高，有效测定范围可达到20500ng/m

4、l，且酶免疫法有标记的试剂比较稳定并且无放射线危害等优点。我们采用对已知抗体浓度的样品进行ELISA的定量检测，通过对其数据的分析来验证ELISA法最乙肝表面抗原定量检测的准确性和可靠性，以衡量其实用性。1材料与方法1.1材料1.1.1试剂盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。1.1.2仪器及酶标板酶标仪：Bio-Rad680；洗板机：Bio-Rad1575；超纯水系统：MilliporeElix；电热恒温培养箱(DNP-9052):上海精宏实验设备有限公司。1.1.3溶液配制⑴0.01M

5、pH7.4的PBS缓冲液：称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。⑵质控品：文档实用标准文案用PBS缓冲液将标准品配制成6、3、1.5ng/ml三个质控品，每质控品1ml。首先取450μl的8ng/ml的标准品到C1号EP管中再向其中加入150μl的PBS缓冲液，即配制成了6ng/ml的质控品，再取300μlC1号EP管内的溶液到C2号EP管内，再向C2号管内加入300μl的缓冲液混匀。即配制成

6、了3ng/ml的质控品。接着取300μlC2号管内的液体到C3号EP管内，再加入300μl的缓冲液混匀，即配制成了1.5ng/ml的质控品。具体方法如下图1C23ng/mlC16ng/mlC31.5ng/ml图11.2检测方法1.2.1标准曲线各浓度的配制⑴用PBS缓冲液将标准品配制成8、4、2、1、0.5、0.25ng/ml。⑵先取6个EP管分别标记为对应的浓度。⑶取400μl标准品于标记为的EP管中，再取200μl号管内液体于号管内再向号管中加入200μl的缓冲液混匀，即配制成了浓度为4ng/ml的标准品。⑷再从号管内

7、取200μl的液体到号管内，接着取200μl的缓冲液到号管内混匀，即配制成了2ng/ml的标准品。⑸从号管内取200μl的标准品到④号管内，再向④号管内加入200μl的缓冲液混匀，即配制成了1ng/ml的标准品。⑹用同样的方法，配制好浓度分别为0.5ng/ml、0.25ng/ml.的标准品体积分别为200μl、200μl、400μl备用。具体方法如下图2S60.25ng/mlS50.5ng/mlS41ng/mlS32ng/mlS24ng/mlS18ng/ml图21.2.2测定方法⑴取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，在相应

8、孔中加入已配制好的系列标准品、质控品及空白对照；文档实用标准文案88631.544631.522631.511631.50.50.5631.50.250.25图3注：双线框区域为标准品,浓度依次为8、4、2、1、0.5、0.25ng/ml，三线框区域为质控品，浓度依次为6、3、1.5ng/ml，粗框区域