肉桂醛与盐酸小檗碱联合氟康唑抗白念珠菌效果体外实验分析

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1、肉桂醛与盐酸小漿碱联合氟康哇抗白念珠菌效果体外实验分析肉桂醛与盐酸小漿碱联合氟康卩坐抗白念珠菌效果体外实验分析【摘耍】目的：研究肉桂醛与盐酸小漿碱单独使用，以及联合氟康I坐抗白念球菌的作用影响与机制。方法：采取体外药物敏感试验方法，检测肉桂醛与盐酸小漿碱单独使用以及联合氟康哩对白念球菌的抗菌活性；凝胶分析软件分析其药物对白念球菌PLB1基因的mR7A表达影响【1】。结果：肉桂醛与盐酸小槃碱单独使用时，其对白念球菌具有明显的抑制生长作用；联合氯康哩作用时，均具有协同作用；药物处理的白念球菌PLB1

2、的mRNA表达水平有明显差异，联合使用时比单独使用时其表达水平明显降低。结论：肉桂醛、盐酸小漿碱与氯康哩都具有明显的抗白念球菌作用，当药物联合时，白念球菌的PLB1基因mRNA的相对表达量明显低于药物单独使用【关键词】体外实验；肉桂醛；盐酸小樂碱；氯康睥；白念球菌【中图分类号】R-0【文献标识码】B【文章编号】1671-8801(2014)02-0332-02近些年，随着抗菌药物和激素在临床上的大量应用，真菌感染率持续升高，其中白念球菌是院内感染的主耍致病菌之一【2】。氟康醴是目前国内治疗白念球

3、菌感染的常用药物，由于在临床上长期的应用,耐药菌株不断产生，白念球菌对氟康啤的耐药问题日渐凸显【3】。研究表明，中药中大量结构新颖、药理活性强的化合物，在抗真菌感染屮具有一定优势。目前，联合应用抗菌药物来避免耐药性产生的减少药物副作用是治疗真菌感染的研究方向之一。本次研究将通过探讨肉桂醛、盐酸小漿碱和氯康哩单独及联合抗白念球菌的作用及机制，为临床上应用中药及中、西药物联合治疗白念球菌感染提供初步试验依据。1资料与方法1.1药液配制1.2菌液配置取-800C冻存的白念球菌ATCC10231菌种10

4、0uL菌液，滴于SDA培养基上，用涂玻棒，将菌液均匀铺于培养基。370C{1温培养箱内lOmin后，将培养皿倒置并继续培养24h。连续画线接种于新培养基上，370C培养24ho直径〉lmm的菌液（5个单菌落）置于生理盐水中，用RP-MI1640培养基稀释菌浓度：5X104CFU/mLo1.33种药物的药敏试验参照美国临床与实验标准协会的真菌药物敏感性试验方案的微量稀释法步骤操作：将肉桂醛、盐酸小漿碱、氯康哇分别用RP-MI1640培养基倍比稀释。加入96孔板中，每孔100uL药液+100uL含菌

5、培养液。同吋设立对照组。每次实验，均设立一组质控菌。经370C培养48h,观察结果。每组设3个复孔，试验重复5次。1.4联合药敏试验采用棋盘微量稀释法检测，在96孔板上，将肉桂醛、盐酸小槳碱、氟康瞠•药物原液分别用RPMI1640培养基倍比稀释，使肉桂醛、盐酸小漿碱、氟康呼的终浓度为单用时测得该种菌株MIC值的1/8、1/4、1/2、1、2、4倍浓度。按照棋盘格法的设计方式，以纵、横两个方向。将不同浓度的两种联合药物各50PL加入96孔板中，每孔再加入100nL配制好的菌悬液，分别混合后进行药物

6、联合作用。同时设阳性对照孔及阴性对照孔，混匀。真菌培养步骤和药理处理吋间同上。1.53种药物的单独及联合对口念球菌PLBlmRNA表达水平的影响试验设对照组、试验组，经370C培养6〜8h后，按照RNApureYeastKit酵母RNA提取试剂盒操作方法，提取各组总RNA,测定总RNA浓度和纯度，在紫外透射仪上观察，并扫描凝胶，检测总RNA的完整性，进行逆转录及PCR反应。采用凝胶分析软件对电泳结果分析,得到内参TFF3、目的基因PLB1的灰度值，目的基因mRNA的相对表达量用目的基因与内参基因

7、条带的灰度值的比值來表示。1.6统计学分析2结果2.1药物单独及其联合抗口念球菌药敏实验的结果药物单独作用于白念球菌时：肉桂醛、盐酸小漿碱、氯康呼抗白念球菌的MIC范围分别为160〜320、80〜160和8〜16ug/mL,其MIC80分别为：320、80>16ng/mL；药物两两联合作用于白念球菌吋，单药MIC值得儿何均数均显著减少(见表1)。表1药物联合抗口念球菌作用效果评价2.2药物对白念球菌和关PLB1基因mRNA表达的影响通过RT-PCR技术，得到内参基因TEF3和PLB1扩增产物分别

8、呈517bp和416bp条带。其PLB1基因在mRNA的相对表达量水平。3讨论木研究通过肉桂醛、盐酸小樂碱单独及联合氟康醴作用白念球菌,对白念球菌PLB1的表达水平进行分析，检测结果显示：肉桂醛、盐酸小漿碱单独抗菌时，均可降低白念球菌酶基因PLBlmRNA的表达量，引起细胞外PL的分泌量降低，当分别与氟康哩联合时，其口念球菌酶基因PLBlmRNA的表达量要明显低于•药物单用。由于肉桂醛和盐酸小槃碱是中药中的天然活性成分，植物资源丰富，•且在长期临床应用中少见不良反应和毒副作用。因此，肉桂醛、盐酸