synapsini在丙烯酰胺致突触可塑性损伤中的作用及bdnf干预的实验研究

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1、中图分类号：R114论文编号：HBLG2015-044UDC：密级：公开硕士学位论文SynapsinI在丙烯酰胺致突触可塑性损伤中的作用及BDNF干预的实验研究作者姓名：王秀会学科名称：公共卫生与预防医学研究方向：卫生毒理学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年4月25日申请学位类别：医学硕士导师姓名：王学生教授单位：华北理工大学公共卫生学院李斌研究员单位：中国疾病预防控制中心职业卫生所论文评阅人：贾光教授单位：北京大学公共卫生学院韩刚教授单位：华北理工大学药学院论文答辩日期：2015年

2、6月8日答辩委员会主席：钱令嘉关键词：丙烯酰胺；NB-1细胞；突触素I；SNARE复合体；BDNF唐山华北理工大学2015年6月RoleofSynapsinIinSynapticPlasticityDamageInducedbyAcrylamideExposureandEffectofBDNFInterventionDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequir

3、ementforthedegreeofMasterofMedicinebyWangXiuhui(PublicHealthandPreventiveMedicine)ProfessorWangXueshengSupervisor:ProfessorLiBinJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使

4、用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘

5、要摘要目的通过探讨丙烯酰胺（acrylamide，ACR）对突触素Ӏ（SynapsinӀ）蛋白表达的影响、对N-甲基马来酰亚胺敏感因子（NSF）附着蛋白受体（SNARE）复合体结合/解离的影响和对SynapsinӀ上游磷酸化激酶的影响，明确ACR致神经元突触损伤对SynapsinӀ上下游蛋白调控的作用机制；通过对突触损伤的神经元进行脑源性神经营养因子（BDNF）的干预，进一步阐明BDNF对神经元突触损伤的保护作用。方法1将NB-1细胞通过二丁酰环腺苷酸（db-cAMP）诱导为成熟神经元细胞后，MTT检测A

6、CR不同染毒浓度（0、25、50、100、150、200和250μg/ml）在不同染毒时间（24、48和72h）对NB-1细胞相对存活率的影响；免疫印记（westernblot）技术检测SynapsinI磷酸化和非磷酸化蛋白表达，免疫共沉淀（Co-IP）试验检测神经元突触损伤前后SNARE复合体的结合/解离的变化，并使用Spearman对其进行相关性分析；使用光镜和电镜分别检测神经元突触损伤前后细胞形态、结构变化；通过westernblot技术分别检测ACR染毒前后丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、环磷酸腺

7、苷（PKA）和Ⅱ型钙离子/钙调素依赖蛋白激酶（Ⅱ型Ca2+/CaM激酶）蛋白表达变化。2将诱导为成熟神经元的NB-1细胞经60μg/mlACR染毒后给予不同浓度BDNF（50、75、100和125ng/ml）干预后通过MTT检测细胞相对存活率；使用荧光定量PCR技术检测BDNF给予干预前后SynapsinImRNA表达的变化，Co-IP试验检测BDNF给予干预前后SNARE复合体结合/解离的变化。结果10、25、50和100μg/ml的ACR染毒剂量染毒NB-1细胞48h后，随着ACR染毒剂量的增加Syn

8、apsinI磷酸化和非磷酸化蛋白表达降低（P＜0.05）；随着ACR染毒剂量的增加，SNARE复合体中突触融合蛋白（syntaxin）和突触小体相关蛋白（SNAP-25）逐渐解离；ACR染毒损伤NB-1细胞后，SNARE复合体中syntaxin和SNAP-25结合状态与SynapsinI、磷酸化SynapsinI（P-SynapsinI）蛋白表达呈正相关(Spearman相关系数r分别为0.897和0.935)，与P-Syna