耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制及分子流行病学研究

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1、上海交通大学硕士学位论文耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制及分子流行病学研究作者姓名：刘婧娴学号：1127229371学科专业：临床检验诊断学指导教师：刘瑛教授研究方向：细菌耐药机制研究关键词：肺炎克雷伯菌；碳青霉烯类抗生素；耐药机制；碳青霉烯酶；膜孔蛋白；分子流行病学；多位点序列分型；脉冲场凝胶电泳申请学位：硕士培养单位：上海交通大学医学院附属新华医院答辩日期：2015年4月29日资助基金：上海市卫生局基金（2010024）StudyonCarbapenemResistanceMechanismandMolecularEpidemiolog

2、yinKlebsiellapneumoniaeAuthor：JingxianLiuStudentNumber：1127229371Major：ClinicalLaboratoryDiagnositicsSupervisor：ProfessorYingLiuResearchDirection：MechanismsofAntimicrobialResistanceinBacteriaKeyWords：KlebsiellaPneumoniae,Carbapenem,AntibioticResistanceMechanism,Carbapenemas

3、e,OuterMembranePorin,MolecularEpidemiology,MultilocusSequenceTyping,Pulsed-FieldGelElectrophoresisAcademicDegreeAppliedfor：MasterDegreeTrainingUnit：XinhuaHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicineOralDefenseDate：04-29-2015SustentationFund：HealthBureauFou

4、ndationofShanghai（2010024）上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被

5、查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□√（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海交通大学2012级硕士研究生毕业论文摘要耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制及分子流行病学研究摘要目的了解上海交通大学医学院附属新华医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制、流行趋势及临床特点。为CRKP院内感染预防控制提供理论依据，并指导临床合理使用抗

6、生素。方法1.收集2009年-2013年我院临床标本中分离到的CRKP，采用Vitek-2Compact全自动微生物分析系统联合纸片扩散法（K-B法）进行药敏试验；2.用改良Hodge试验及亚胺培南/亚胺培南-EDTA金属酶抑制试验（IP/IPIE-test）进行碳青霉烯酶及金属酶表型筛查；3.PCR方法及基因测序检测碳青霉烯酶、AmpC酶及ESBLs酶基因；4.采用SDS-PAGE检测外膜蛋白的表达情况；5.对产碳青霉烯酶菌株进行质粒转移接合试验；6.对外科重症监护室（SICU）进行环境标本采样并筛选CRKP；7.采用多位点序列分型（MLS

7、T）及脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法对临床标本及环境样本分离到的CRKP进行基因分型，并结合患者的临床资料探讨我院CRKP的分子流行病学特点。结果1.2009年-2013年期间共收集了84株分离自临床标本的CRKP。2.72株改良Hodge试验阳性，1株IP/IPIE-test试验阳性。3.PCR及测序结果显示72株改良Hodge试验阳性的菌株中有69株携带KPC-2基因，2株携带IMP-4基因，1株携带NDM-1基因，上述菌株还同时携带1~3种ESBLs基因。12株改良Hodge试验阴性的菌株仅携带DHA-1基因和/或1~2种ESBLs基因

8、。4.84株CRKP中5株外膜蛋白表达正常，3株缺失Ompk36，1株缺失Ompk35，其余75株存在外膜蛋白变异。5.4株产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌转移接合试验成功