携带blandm-1基因肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制的研究

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作槲(褐)：讼松鳓期：加侈年学位论文版权使用授权书毛R7

2、日本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许

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4、和blaNDM基因的转移和传播机制。方法：使用VITEK．32全自动细菌分析仪进行菌种鉴定，纸片扩散法测定菌株对抗生药物的敏感性，用E．test方法重新测定细菌对各类抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。改良Hodge试验进行碳青霉烯酶表型的筛选；三维试验检测AmpC酶；EDTA．Etest试纸条协同试验检测金属酶；用PCR扩增TEM、SHV、CTX．M．1、CTX．M．9、KPC．1、KPC．2、GES、IMP．1、IMP．2、VIM-1、VIM-2、SPM．1、DHA、CMY、ompK35、ompK36和N

5、DM．1基因，并对阳性基因进行测序分析确定其基因型；用脉冲场凝胶电泳和多位点序列分型分析细菌的同源性；质粒接合试验和转化试验验证NDM．1基因是否位于质粒上。结果：2011年1月．2012年6月共收集到27株耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌，发现2株肺炎克雷伯菌携带有NDM．1基因。其中肺炎克雷伯菌KPl2还同时携带有SHV．1基因；肺炎克雷伯菌KPl8同时携带有TEM．1、SHV．12和CTX．M．14基因，以及还携带有氨基糖苷类抗菌药物16SrRNA甲基化酶armA基因。肺炎克雷伯菌KPl2和KPl8多

6、位点序列分型分别为STl5和新序列型STl031。脉冲场凝胶电泳显示2株细菌为不同克隆型。接合试验显示肺炎克雷伯菌KPl2接合成功，而肺炎克雷伯菌KPl8未接合成功。2株细菌耐药质粒经转化试验均成功转入至大肠埃希菌DH5a。结论：在我国内陆地区，首次发现2株肺炎克雷伯菌携带NDM．1基因，该NDM．1基因都位于70kb的质粒上，提示两株细菌携带的NDM．1可能在类似的质粒间传播，且患者都无国外旅行史。关键词：肺炎克雷伯菌；碳青霉烯类抗生素；耐药性；NDM．1AbstractABSTRACTobjective

7、：Theaimofthisstudyistoinvestigatetheresistancemechanisms．molecularcharacteristicsandprevalenceofblaNDM一1inKlebsiellapneumoniaeclinicalisolatesfromNanchangseveralhospitals．Methods：IdentifiedbyVitek一32automatedmicrobialidentified．Antimicrobialsusceptib-ility

8、testingwasdeterminedbydiscagardiffusionmethodandconfirmedbyE-test．p-lactamases(AmpC，rd'C)werescreenedbythreedimensionaltest．Metallo—beta-lactamaseWasdeterminedbyEDTA-disksynergytest．TEM、SHV、CTX·M-1、C1、X-M．9、KPC．1、KPC．2、GES、IMP．1、IMP．2、VIM．1、VIM．2、SPM．1、DHA

9、、CMY、ompK35、ompK36andNDM一1weredetectedbyPCR．andthepositvesamples’genotypeswereconfirmedbyDNAsequencing．MoleculartypingwasdeterminedbyMulti-locussequencetyping(MLST)andPulsed—fieldgelelectroph·oresis(PFGE)．Con