耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌耐药机制研究.docx

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1、耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌耐药机制研究目的探讨耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌(Carbapenem-ResistantEnterobacteriaceae,CRE)耐药机制,为临床合理应用抗菌药物提供理论指导,为耐药菌株的控制提供科学依据。方法1.筛选吉林大学第一医院检验科2012~2014年分离出的CRE菌株。2.使用纸片琼脂扩散法、MIC法检测CRE菌株对抗菌药物的耐药性,分析其耐药谱。3.应用改良Hodge试验及CarbaNP试验共同筛查CRE菌株产碳青霉烯酶的情况,比较两种方法结果。4.利用聚合酶链反应(PCR)技术检测CRE菌株的23种耐药基因,分析每株CRE菌株所携带的耐

2、药基因种类。5.利用实时荧光定量PCR技术检测CRE菌株外膜蛋白mRNA含量,分析外膜蛋白的表达。6.查阅患者病例,分析CRE菌株产生的影响因素。结果1.12株CRE菌株包括:产酸克雷伯菌1株、肺炎克雷伯菌4株、大肠埃希菌1株、弗劳地枸橼酸杆菌1株、摩根摩根菌1株、阴沟肠杆菌4株。除1株阴沟肠杆菌外,其他CRE菌株均来自患者无菌体液。2.12株CRE对哌拉西林、头孢呋辛、头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率为100%;复方新诺明的耐药率为83%;亚胺培南、美罗培南的耐药率均为75%;左氧氟沙星、环丙沙星的耐药率均为58%;哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星的耐药率分别为

3、33%、17%。3.改良Hodge实验阳性8株:1株产酸克雷伯菌、3株肺炎克雷伯菌、4株阴沟肠杆菌。4.CarbaNP试验阳性菌株9株:1株产酸克雷伯菌、4株肺炎克雷伯菌、4株阴沟肠杆菌。5.细菌基因组耐药基因PCR结果:对12株CRE菌株进行23种耐药基因检测,扩增出blaIMP-1、blaIMP-2、blaCTX-M-1、blaCTX-M-2、blaCTX-M-9、blaSHV、blaACC、blaDHA、blaqnrB、blaqnrS等10种耐药基因。每株CRE菌株携带2~6种耐药基因。6.实时荧光定量PCR结果显示,3株肺炎克雷伯菌的OmpK36基因相对表达量明显下降,而2株阴沟肠杆

4、菌OmpF、OmpC基因相对表达量同时下降,另外2株阴沟肠杆菌仅表现为OmpC基因相对表达下降。7.12株CRE菌株均分离自住院患者,分别为外科8株、ICU科1株、感染科1株、神经内科1株、小儿呼吸科1株。患者住院时间8~65天,除2例外其余患者均进行过开放性操作,除9号患者外,所有患者入院以来均进行过抗菌药物治疗。结论1.12株CRE菌株对各类抗菌药物的耐药率较高。2.CarbaNP试验具有准确度高、检测速度快的优点,应为临床实验室首选检测碳青霉烯酶的手段。3.CRE菌株可同时携带碳青霉烯酶B类(blaIMP-1、blaIMP-2)、ESBLs(blaCTX-M-1、blaCTX-M-2、

5、blaCTX-M-9、blaSHV)、AmpC酶(blaACC、blaDHA)、喹诺酮类(blaqnrS、blaqnrB)等耐药基因。4.耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌存在外膜蛋白表达缺失的情况。5.6.7.