重组乙醛脱氢酶的分离纯化及其酶学性质研究 食品专业毕业论文

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1、重组乙醛脱氢酶的分离纯化及其酶学性质研究目录摘要1关键词1Abstract1Keywords1引言11材料与方法21.1材料21.1.1菌株21.1.2培养基21.1.3主要试剂21.1.4主要仪器21．2方法21.2.1乙醛脱氢酶的表达和制备21.2.2乙醛脱氢酶的纯化31.2.3乙醛脱氢酶活力测定31.2.4蛋白含量测定31.2.5纯度鉴定和分子量测定31.2.6乙醛脱氢酶酶学性质31.2.6.1酶的最适反应pH及pH稳定性31.2.6.2酶的最适反应温度及热稳定性31.2.6.3金属离子和其他化合物

2、对酶活力的影响31.2.6.4不同底物对酶活性的影响31.2.6.5动力学常数Km和最大反应速度Vmax的测定32结果与分析32.1乙醛脱氢酶的分离纯化32.2乙醛脱氢酶酶学性质研究42.2.1酶的最适反应pH及酸碱稳定性42.2.2酶的最适反应温度及热稳定性52.2.3金属离子和其他化合物对酶活性的影响62.2.4不同底物对酶活性的影响72.2.5酶的动力学常数73讨论8致谢9参考文献：9重组乙醛脱氢酶的分离纯化及其酶学性质研究摘要：【目的】研究工程菌E.ColiBL21(DE3)/pET32a-ist

3、ALDH产乙醛脱氢酶的纯化和酶学性质。【方法】工程菌经过IPTG诱导后产生乙醛脱氢酶，通过Ni-NTA亲和层析纯化，得到纯度较高的酶蛋白，并对纯酶进行了酶学性质及动力学研究。【结果】酶最终被纯化了9倍，并达到电泳纯。经过SDS-PAGE测得该酶的分子量约为57kDa。以乙醛为底物，酶促反应的最适温度为40℃，最适pH值为9.0，热稳定性和酸碱稳定性相对较差；金属离子K+、Li+、AL3+对酶均具有激活作用，而Ag+、Zn2+、Gu2+对酶促反应具有强烈的抑制作用，酶活性基本丧失，在化合物EDTA、DTT中

4、活性明显提高，SDS使酶完全丧失活性；反应的最适底物是乙醛和NAD+,乙醛和NAD+动力学常数Km值分别为1.034mmol/L和0.274mmol/L，最大反应速度Vmax分别为29.07U/mg和22.62U/mg。【结论】研究为重组乙醛脱氢酶纯酶的纯化、得到稳定性好、活性高的酶反应体系及利用该酶进行催化反应和工业化应用提供了重要参数。关键词：乙醛脱氢酶；纯化；酶学性质StudyonPurificationandCharacterizationofRecombinantALDHStudentmajor

5、inginNationalLifeScienceandTechniqueTalentTrainingBase JieXuTutorZhaoxinLuAbstract：[Objective]TopurifyandcharacterizerecombinantaldehydedehydrogenaseexpressedinengineeredstrainE.ColiBL21(DE3)/pET32a-istALDH.[Methods]Thealdehydedehydrogenasegenewasexpresse

6、dinengineeredstrainafterIPTGinductionandthecrudeenzymewasobtainedbysonication.WepurifiedtherecombinantaldehydedehydrogenasebyusingmetalchelateaffinitychromatographyonaNi-NTAcolumn.Thenwecharacterizedcatalytickineticparameterofpurifiedenzyme.[Results]Themo

7、lecularweightofaldehydedehydrogenasemeasuredbySDS-PAGEwas57.2kDa.Theenzymehadanoptimumtemperatureat40℃,andanoptimumpHof9.0.ItwasunstablewiththermostabilityandpHstability.MetalionsK+、Li+andAL3+couldactivetheenzymeactivity,whileAg+、Zn2+andGu2+couldstronglyi

8、nhibittheenzymeactivity.ThecompoundsEDTAandDTTcouldactivetheenzymeapparentlywhileSDScouldgreatlyinhibittheenzyme.TheoptimalsubstrateswereacetaldehydeandNAD+withthekineticconstantKmof1.034mmol/Land0.274mmol/L,respect