华东地区部分猪场关节炎主要病原菌流行状况调查及致病基因变异分析

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1、上海交通大学硕士学位论文华东地区部分猪场关节炎主要病原菌流行状况调查及致病基因变异分析硕士研究生：韩少鹏学号：1121509081导师：朱建国教授申请学位：农业推广硕士学科：养殖所在单位：农业与生物学院答辩日期：2015年01月授予学位单位：上海交通大学1DissertationSubmittedtoShanghaiJiaoTongUniversityfortheDegreeofMasterINVESTIGATIONONEPIDEMICSTATUSOFPROCINEARTHRITISANDGENETICVARIATIONOFVIRULENCEGE

2、NEOFMAINPATHOGENSINEASTCHINACandidate：ShaopengHanStudentID:1121509081Supervisor：Prof.JianguoZhuAcademicDegreeAppliedfor：MasterofAgriculturalExtensionSpeciality：BreedingAffiliation：SchoolofAgricultureandBiologyDateofDefence：January,2015Degree-Conferring-Institution：ShanghaiJia

3、oTongUniversity上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文《华东地区部分猪场关节炎主要病原菌流行状况调查及致病基因变异分析》，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或

4、机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密。学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日项目资助浦东新区科技发展基金创新资金“浦东地区猪关节病主要病因调查及综合防治措施研究”（PKJ2014-NO7）；上海市“生猪产业技术体系建设项目”上海交通大学硕士学位论文华东地区部分猪场关节炎主要病原菌流行状况调查及致病基因变异分析摘要猪关节炎（porc

5、inearthritis）是指由一种或多种因素造成的关节组织炎症，通常由细菌性病原引起。据研究，我国大部分猪场关节炎主要由猪链球菌（streptococcussuis，S.suis），副猪嗜血杆菌（haemophilusparasuis,HPS）和葡萄球菌（Staphylococcus）等病原菌引起，给猪养殖业带来了极大损失。S.suis和HPS还能引起猪其他的临床症状，且由于长期应用抗生素，导致病原菌表现出多重耐药性，给猪场疾病防治造成了很大困难。为了解我国华东地区部分猪场猪关节炎主要病原体的流行状况，本文根据链球菌2型（streptococc

6、ussuistype2，S.suis2）的荚膜多糖基因cps2J和HPS的16srRNA基因建立了检测猪链球菌2型和副猪嗜血杆菌的二重PCR检测方法，利用该方法，对2013-2014年期间华东地区部分猪场疑似猪关节炎的120份细菌样品进行检测鉴定，获得14株S.suis2和12株HPS。在120份细菌样品中检测到21株Ssuis，表明S.suis2是链球菌中主要流行菌株，并通过进一步建立的系列多重PCR方法证明S.suis分离株的毒力因子分布型为低毒力型：+cps2J-/+mrp-ef-sly-gdh-/+gadph-/+orf2。将14株S.s

7、uis2的荚膜多糖基因cps2J与四株国内株和两株国外株进行序列比对，结果显示同源性为94%—99%，说明S.suis2分离株的cps2J基因发生了变异，基因进化树分析表明华东地区S.suis2具有广域性；对4株HPS分离株进行tbpA基因的限制性片段多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP）分型分析，结果表明4株HPS都为副猪嗜血杆菌杆菌最流行的DBE型。对S.suis和HPS分离株进行药敏试验，发现两种菌表现多重耐药性，并且青霉素类类和头孢菌素类药物对两I上海交通大学硕士学位论文者均有较好的

8、敏感性，提示青霉素类药物和头孢菌素类药物可作为猪关节炎的治疗药物。本研究首先为检测猪场关节病主要病原提供了快速准确的检测方法，检测结果为