动物用狂犬病口服疫苗佐剂与诱饵的制备与筛选

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1、分类号：Ｓ８５２．３１；１０７５８学校代码．密级：１３３６０２０３６４：公开学号杂巧Ｐｉ丈净兽医硕±专业学位论文动物用狂犬病口服疫苗佐剂与诱巧的制备与締选ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＳｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆＩｍｍｕｎｉｔｙ乂ｄｊｕｖａｎｔａｎｄＢａｉｔｓｆｏｒ，ｎ．ＯｒａｌＶａｃｃｉｎｅａｇａｉｎｓｔＲａｂｉｅｓＵｓｅｄｉｎＡｎｉｍａｌｓ？；．－．南Ｖｙ＇．ＶＹｊ研究生姓葦古丽麦拉？卡日校内导师姓姜义职称

2、简子健教授校外导师姓秦及职称李岩推广研究员专业学位类别兽医硕去领域雀称研究方向动物分子与免疲病理学所在学院动妨度学学院．Ｖ；Ｖ；■，■＇．新疆？乌鲁木齐：——二〇五年五月．苗，．，．独创性声明本人声明所里交的论义是我个人在导师巧甘下进行的研究：：［作展取得的研究成巧。尽我所知，除了文中特别加１＾乂标注和致谢的地外，论文中不包含其它人已经发表或撰与过的研究成果，也不包含为获得新疆农业乂一学或其它教肯单位的学位或证

3、书而使用过的材料。与我同工作的同志对本硏究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：否如襄起：每日时间：年＾月日７关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：新疆农业大学有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文牲，可１：＾采用影巧、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可炒、公布（包巧刊登）论文的全部或部分

4、内容。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：４麻ｉｉ＇韦国时间：茄之证年６月／ｆｔＪ导师签名时间：，＾年月Ｂ本文是新疆维吾尔自治区自然科学基金青年基金项目“野生动物用狂犬病口服疫苗包裹诱饵的研制”的部分研究成果（项目编号：2014211B018）课题主持人：翟少华（新疆农业大学动物医学学院）动物用狂犬病口服疫苗佐剂与诱饵的制备与筛选摘要野生食肉类动物，如野狼、野狗、赤狐、浣熊等是狂犬病病毒的自然携带者或传播者。防止野生食肉类动物的狂犬病在人和家养动物之间的扩散是防制狂犬病的重要环节

5、。与家养动物注射用疫苗不同，野生食肉类动物口服疫苗由抗原、佐剂、诱饵三个部分组成。本研究的目的是（1）用细菌脂多糖、氢氧化锌、枸杞多糖、甘露低聚糖筛选适合口服疫苗用的免疫佐剂，并验证其增强免疫反应的效果；（2）用牛肉粉、鸡肉粉、鱼肉粉、奶粉、血粉为主料制备口服疫苗用诱饵，并检测诱饵的采食性以及包埋效应。研究方法：采用同步接毒法在BHK-21细胞上增殖狂犬病病毒SRV9弱毒疫苗株，通过半数荧光灶形成量（FFD50）试验对培养病毒滴度进行检测。通过正交试验方法对细菌脂多糖、氢氧化锌、枸杞多糖、甘露低聚糖进行配方筛选

6、，用昆明小鼠做佐剂的免疫效力实验。筛选出的最佳复合佐剂与狂犬病病毒SRV9弱毒疫苗混匀后灌喂实验组小鼠，人用狂犬病疫苗腹腔3次注射、单一病毒2次口服以及单一病毒3次口服的小鼠分别作为对照组。于免疫后14天（DAI14）、DAI21、DAI28以及DAI35分别采集实验组和对照组小鼠血液，检测血清IgG。用荧光抗体病毒中和试验（FAVN）对DAI35的实验组小鼠血清抗体进行中和试验。用正交试验的方法优选诱饵配方，用理化方法检测其采食性和包埋效应。研究结果：（1）增殖、获得的狂犬病SRV9弱毒滴度（FFD50）为1

7、0-5.42/0.1mL；（2）优选的复合佐剂组方是细菌脂多糖100µg、氢氧化锌0.8mg、枸杞多糖50mg以及甘露低聚糖10mg。在DAI28，实验组小鼠的血清IgG和肠道SIgA水平均值分别为3239µg/mL和1.56ng/mL；（3）在DAI35，复合佐剂+狂犬病病毒组诱导的体液免疫效果优于单一病毒2次口服实验组和单一病毒3次口服实验组，血清抗体平均效价为0.63IU/mL，已达到保护水平；（4）制备出五种诱饵组方，即鱼肉味、血粉味、牛肉味、鸡肉味、奶粉味诱饵组方；（5）在诱饵的采食试验中，猫、犬、狼

8、、狐狸对鱼肉味诱饵的采食率最高，其次是血粉味和奶味诱饵；（6）诱饵在-80℃、-20℃可长期保存，在4℃、7d条件下保存完好，即诱饵质地适中，不变形、无着染包埋疫苗渗漏。在37℃、12h条件下，鱼肉味和血粉味诱饵保持相对稳定，即质地适中、无包埋物渗漏，而牛肉粉、鸡肉粉、奶粉型诱饵出现变形、渗漏。小结：本文筛选出野生食肉类动物口服疫苗所必需的复合免疫佐剂。免疫佐剂+狂犬病病毒可增加狂犬病