tie2信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用

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1、ASOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文P〇G轉mm论文题目Tie2信号系统激活对血管内皮细朐的保栌怍田研究生姓名_______________王震指导教师姓名_______________李晓忠教授专业名称___________________儿科学研究方向__________________小儿肾脏论文提交日期_________________2015年4月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下’独1进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外

2、，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名:苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子

3、杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在____年_月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名:日期:导师签名:知少<日期:、卜s'-fTie2信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用中文摘要Tie2信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用中文摘要研究背景：微血管内皮损伤是急性肾损伤和慢性肾脏疾病共同的病理改变，贯穿于它们的发生、发展过程。与肾小管上皮细胞相比，

4、肾微血管内皮细胞缺乏有效的再生能力，当肾功能恢复到正常水平以后，肾周微血管密度的降低或丢失的病变仍将长期存在，最终将导致慢性肾小管间质纤维化。Tie2信号系统被认为在血管内皮的保护方面起着重要的作用，研究中该信号系统的激活多应用Ang-1，但也有研究显示Ang-1促进急性肾损伤，炎症细胞浸润，后期促进肾纤维化。因而我们集中研究Tie2信号对血管内皮的保护作用。目的：本研究建立脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤，探讨Tie2信号系统激活对血管内皮细胞是否具有保护作用。为后期进一步研究提供依据。方法：第一部分离体培

5、养人脐静脉血管内皮细胞HUVEC，以4×104接种于96孔板，200ul/孔。分别以浓度0ug/ml，0.125ug/ml，0.25ug/ml，0.5ug/ml，1ug/ml，2ug/ml，5ug/ml，10ug/ml的LPS刺激损伤细胞。孵育24小时，采用cck8法测定细胞活性。根据结果选择适宜的LPS浓度，建立细胞损伤模型。第二部分根据第一部分结果选择LPS刺激浓度为10ug/ml。细胞分为三组：正常对照组；LPS组；LPS+Tie2单抗组。应用Elisa技术检测孵育24小时后各组细胞上清sVCAM-

6、1的表达水平。应用PCR技术检测孵育6h后各组细胞VCAM-1mRNA的水平变化。应用PCR技术检测孵育6h后各组细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2的水平变化。应用WESTERNBLOT技术检测孵育24、48小时后，各组细胞α-SMA的表达水平的变化。结果：第一部分cck8结果显示，内皮细胞被不同浓度LPS损伤刺激后，各浓度LPS均对细胞增殖活性产生抑制作用，与正常细胞比较差异有统计学意义（P<0.05）。第二部分采用10ug/mlLPS刺激损伤细胞后，LPS组细胞上清sVCAM-1分泌量与VCAM-1m

7、RNA较空白对照组明显升高（P<0.05）。加入Tie2激发单抗后水平下降（P<0.05）。孵育6h后，LPS组细胞BaxmRNA与BaxmRNA/Bcl-2mRNA较空I中文摘要Tie2信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用白对照组明显升高(P<0.05)。加入Tie2激发单抗后水平下降（P<0.05）。各组Bcl-2基因水平无明显差异（P>0.05）。孵育24h及48h后，LPS组细胞α-SMA水平较空白对照组明显升高(P<0.05)。加入Tie2激发单抗后水平下降（P<0.05）。结论:1.LPS可引

8、起血管内皮细胞不同程度损伤，Bax基因表达增加提示细胞凋亡增加，VCAM-1表达增加提示细胞发生炎症反应，α-SMA水平升高，提示细胞发生了转分化。2.加入Tie2激发单抗后，细胞VCAM-1蛋白与基因水平低表达、Bax/Bcl-2下降说明Tie2信号系统激活对血管内皮细胞具有抗炎、抗凋亡的作用。3.加入Tie2激发单抗后，细胞α-SMA表达水平下降，说明Tie2激发单抗可以抑制细胞向肌成纤维细胞方向转分化。关键词：Tie2信