鹦鹉热嗜衣原体包涵体膜蛋白cpsit_0846抗感染免疫保护作用

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3、，南华大学勇委１：员刘卓然委，主任巧师，硕导，南华大学附二医院员２；李忠玉，教授，硕导，亩华大学３；委员，陈超群副教授，硕导，南华大学委员４：陆春雪，副教授，硕导，南华大学答辩２０巧年Ｓ月２２日日期：鹦鹉热嗜衣原体包涵体膜蛋白CPSIT_0846抗感染免疫保护作用摘要[目的]研究鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydophilapsittaci，Cps）包涵体膜蛋白（Inclusionmembraneproteins，Incs）CPSIT_0846的抗感染保护作用，为研制新型、有效和特异的Cps亚单位疫苗奠定基础。45[方法]：将Cps6BC经鼻感染BALB/c小

4、鼠，设置5×10、5×10、56×10IFU三个剂量组，建立小鼠呼吸道感染模型。将CPSIT_0846蛋白编码基因，经原核表达、HIS树脂纯化后获得重组蛋白。将CPSIT_0846重组蛋白经腹腔注射途径免疫小鼠，末次免疫后15d，ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性IgA、IgG及IgG亚类；检测小鼠脾细胞培养上清中的IFN-γ、IL-6等细胞因子产生水平；并经呼吸道感染Cps6BC，比较免疫组与非免疫组小鼠发病情况、存活率及4肺组织病变程度，评价CPSIT_0846的免疫保护作用。[结果]1.5×10、565×10、5×10IFUCps6BC经呼吸道感染BALB/c小鼠，小鼠出现不同程

5、度的临床症状及脏器器官的病理改变，并呈明显的剂量依赖关5系。根据临床症状、存活率及组织病变程度等指标，确定5×10IFU为最佳感染剂量。2.将重组蛋白经腹腔注射途径免疫三次后，小鼠血清中产生高效价的特异性IgG与IgA抗体，其中总IgG效价为1：48000，IgG1为1:10400，IgG2a为1:3000，IgG2b1:16000,IgG31:10400，IgA为1:400，均明显高于对照组（P＜0.01）。3.检测各组小鼠脾细胞上清中细胞因子，结果显示，在脾细胞上清中检测到了高浓度的IFN-γ和IL-6，CPSIT_0846免疫组的IFN-γ含量为I544.97±80.93pg/mL

6、，PBS组25.86±12.54pg/mL、卵清蛋白组32.29±12.77pg/mL，CPSIT_0846组IFN-γ水平与PBS组和卵清蛋白组比较差异有统计学意义（P＜0.01）；免疫组IL-6含量334.25±34.47pg/mL，PBS组和卵清蛋白组含量分别为27.07±7.55pg/mL和30.20±7.17pg/mL，CPSIT_0846组IL-6含量明显高于对照组（P＜0.01）。CPSIT_0846免疫组的脾淋巴细胞刺激指数（SI）为2.27，明显高于PBS组和卵清蛋白组刺激指数（P＜0.01）。4.CPSIT_0846蛋白免疫组小鼠经Cps呼吸道感染10d后，肺部组织病

7、理改变较轻，而对照组没有明显保护作用。[结论]1.建立了Cps6BC标准株呼吸道感染BALB/c小鼠的动物模型。2．CPSIT_0846蛋白可使免疫小鼠产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答，对小鼠抗感染Cps感染具有较好的免疫保护效果。关键词：鹦鹉热嗜衣原体；CPSIT_0846；呼吸道感染；免疫保护作用IIVACCINATIONWITHCPSIT_0846ELICITSPROTECTIONINMICEAGAINSTACHLAMYD