盐析萃取分离纯化血浆蛋白和重组人胰岛素

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1、丈連嫂＾２？大摩ＤＡＬＩＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ工醒硕士享位文ＭＡＳＴＥＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ—ｗ盐析萃取分离纯化血架蛋白和重组人胰岛素Ｔ工程拜领诚生物作者姓名庞博蝰１董悦生副教授指导教师—－答辩日期＿２０１５＿＾６＿Ｊ＿丄…专业学位硕士学位论文盐析萃取分离纯化血衆蛋白和重组人胰岛素ＴｈｅＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｌａｓｍａＰｒｏｔｅｉｎａｎｄＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｎｉ－ｔｉｔＨｕｍａｎ

2、ＩｎｓｕｌｉｂｙａｌｔｎｏｕｔＥｘｔｒａｃｏｎＳｇ作者姓名：庞博峰工程领域：生物工程学号：３１３１８０２０指导教师：董悦生完成日期－０６：２０１５ＤａｌｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表的研宄成果，也不包含其他已申请学位或其他用途使用过的成果一。与我同工作的同志对本

3、研究所做的贡献均己在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。学位论文题目：ｆｔ斯务取令也化逸虞氣命寺城人作者签名：日期：滅年Ａ（月丨１日碑大连理工大学专业硕士学位论文摘要ＩｇＧ和白蛋白是血衆中主要的功能蛋白质，临床上用于抗病毒、治疗烧伤和失血过一多引起的血流动力学疾病等一。胰岛素是体内唯个降低血糖的激素，临床上多用来治疗糖尿病。当前，工业上蛋白质的分离纯化主要采用有机溶剂沉淀、多步离心等初分离的方法以及柱层析的方法进行分离纯化，这些方法存在着操作繁琐、周期长、蛋白

4、的回收率低和易失活等问题，本论文幵展了亲水性有机溶剂盐析萃取偶联柱层析分离纯化血楽中ＩｇＧ和白蛋白的研究和盐析萃取分离纯化重组人胰岛素的研究。首先，在前人的结果基础上，验证了５００ｇ体系中１７．５％乙醇／２０％Ｋ：２ＨＰ０４体系和１４％乙醇／２０％Ｋ２ＨＰ０４盐析萃取分离效果，发现１４％乙醇和２０％Ｋ２ＨＰ０４体系放大稳定，在Ｈ７．０下，白蛋白和ＩＧ分布在上相且得率分别为９０％和６５％。１７．５％乙醇２０％ｐｇ／Ｋ２ＨＰＯ４体系则易使ＩｇＧ沉淀。对１４％乙醇／２０％Ｋ２ＨＰＯ４体系的萃取相，进行了疏水层析和离子交换

5、层析条件的优化，在优化的条件下，可以得到电泳纯的ＩｇＧ，但白蛋白的纯度较低。其次考察了血衆蛋白在叔丁醇／盐体系中的分配情况。结果表明，在１５％叔丁醇／１４％Ｋ２ＨＰＯ４，ｐＨ７．０和添加７．５％ＮａＣｌ的条件下，血装中的白蛋白主要分布在下相，收率为９８％，而ＩｇＧ以沉淀的方式分布在上下相界面中间，收率为７７％，有利于两种蛋白的分离。将叔丁醇Ｋ２ＨＰＯ４体系的的萃取相和沉淀相，使用优化的疏水层析和离子交／换层析进行纯化，可以得到电泳纯度为１００％的ＩＧ和纯度为８７％的白蛋白，该方法操ｇ作简便、收率高，具有较好的应用

6、前景。最后研究了重组人胰岛素在盐析萃取体系中的分配情况，并通过对盐析萃取体系的。初蹄及条件的优化，蹄选出了最优的盐析萃取体系在１８％乙醇／２２％Ｋ２ＨＰ０４，ｐＨ９．０，重组人胰岛素分布在上相条件下，回收率在９８％以上。关键词：盐析萃取；血装蛋白；重组人胰岛素；离子交换层析；疏水层析－－Ｉ盐析萃取分离纯化血奖蛋白和重组人胰岛素ＴｈｅＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｌａｓｍａＰｒｏｔｅｉｎａｎｄＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓｕ－ＨｕｍａｎＩｎｌｉｎｂｙＳａｌｔｉｎｏｕｔＥ

7、ｘｔｒａｃｔｉｏｎｇＡｂｓｔｒａｃｔＩｇＧａｎｄａｌｂｕｍｉｎａｒｅｔｈｅｍａｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｒｏｔｅｉｎｓｉｎｔｈｅｌａｓｍａｗｈｉｃｈａｒｅｕｓｅｄｉｎｔｈｅｐｐ，ｃ－ｒｌｉｎｉｃｆｏｒａｎｔｉｖｉｒｕｓｔｒｅａｔｔｏｆｂｕａｎｄｂｌｅｅｄｉｎ．Ｉｎｓｌｉｎｉｓｔｈｅｌｈｏｍｏｎｅｉｎｔｈｅｂｏｄｙｔ，ｍｅｎｍｇｕｏｎｏｙｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｂｌｏｏｄｓｕｇａｒ，ｗｈｉｃｈｉｓｃｌｉｎｉｃａｌｌｙｕｓｅｄ

8、ｔｏｔｒｅａｔｄｉａｂｅｔｅｓ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｏｒｇａｎｉｃｓｏｌｖｅｎｔｒｅｃｉｉｔａｔｉｏｎ，ｍｕｌｔｉｌｅ