环境因子对微拟球藻脂质代谢及其硫脂酶转录水平的影响

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1、ＡＮＩＩＮＯＯＩＶＫＲＳＩＴＹＯＦ（ＨＩＮＡ硕ｉ学位论文ＭＡＳＴＥＲＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ环境因子对微拟球藻脂质代谢论文题目：及其硫脂酶转录水平的影响Ｔｈｅｉｎ幻ｕｅｎｃｅｏｆｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎ化１位ｃｔｏｒｓｏｎｌｉｉｄｐｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｐ英文题目：ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅｏｆＮａｒｍｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓｏｃｅａｎｉｃａ作者：王丽丽擔导教师：潘克厚教授学位类别：

2、全日制学术学位专业名称：７Ｃ生生物学）硏究方向：水生生物遗传学ＬｒｔＩ，Ｗ＾Ｊ＾谨１：１此论文献给我的父母和老师！王月日日Ｈ及其硫脂酶环境因子对微拟球藻脂质代谢转录水平的影响学位论文答辩日期：悼—指导教师签字：：含答辩委员会成员签字４１＾独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的标注和致谢的地方外，论文中不包含其研究成果。据我所知，除了文中特别加他人已经发表或撰写过的研巧成果，也不包含未

3、获得（明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使注：如没有其他需要特别声一中作了明用过的材料。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均已在论文确的说明并表示谢意。＾日签字日期：約＾月３学位论文作者签名：＞１学位论文版权使用授权书，并同意Ｗ下本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定事项：，允许１口或机构送交论文的复印件和磁盘、学校有权保留并向国家有关部论文被查阅和借阅。’可Ｗ２内容编入有关数据库进行检索、学校可Ｗ将学位论文的全部或部分＂采用影印、汇编学位论文。

4、同时授权清华大学中、缩印或扫描等复制手段保存＂国学术期刊用于出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，（光盘版）电子杂志社授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）导师签字：学位论文作者签名：主？＾＾＾＇曰签字曰期：？月曰签字曰期：＞年月／＾／￥＾１５＾］１＾环境因子对微拟巧藻脂质化谢及其硫脂酶转录水平的影响环境因子对微拟球藻脂质代谢及其硫脂酶转录水平的影响摘要随着人口的增长巧世界经济的飞速发展，化石能源的消耗

5、日益加剧。为解决由此带来的能源危机和环境问题，世界各国不得不加快开发化石能源的替代燃一料，。近年来生物柴油做为种清洁可再生能源受到越来越多的重视。生物柴油，但其传统原料可能会对农产品价格，虽然优点众多、粮食安全产生影响。因此选择一种低廉的、安全的原料来生产生物柴油是发展的总趋势。Ｍｗｎｏ一微拟球藻（ｃ／ｚ／ｏｒａｐ地于真眼点藻纲巧ｕｓｔｉｍａｔｏｈｃｅａｅ，是类重要）属ｇｐｙ）的单细胞经济微藻。它富含蛋白质、多不饱和脂肪酸、色素等高附加值产物，且光合效率高、环境适应性强，油脂含量可Ｗ达到细胞

6、干重的３０％，能够进行大规模培养，被认为是生产生物柴油颇具前景的原料。尽管微藻做为生物柴油的原料有其它原料不可比拟的优势，但天然微藻脂肪酸的饱和度和长度并不适合生物柴油的生产。近年来，通过改变培养基组成、控制培养条件＾心及基因工程法提高微藻油脂含量和脂肪酸质量成为生物柴油研究的热点。实验包括下两个部分：一ＮＡ一，第部分：分析微拟球藻ｃＤ文库从微拟球藻中分离出条硫脂酶基因的ｃＤＮＡ全长，命名为怎。ｉＶｏ：Ｔ￡全长ｌ，３１４ｂｐ，编码４３７个氨基酸，蛋白５５ｋＤ－质相对分子质量为。将该基因

7、连接到原核表运载体ｐＥＴ３化上，转入大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中诱导表达进行功能的初步验证。实验结果显示，表达Ｍ＞：ｒ左并未改变大肠杆菌的脂肪酸组成Ｃ］４：ｌ、Ｃ１６ｌ１ｌ：０、Ｃ１６：、Ｃ８：，但其及总脂肪酸含量较不含重组质粒菌株分别提高了１１％、１８％、３２％、４９％和３０％，证明克隆的硫脂酶基因能在大肠杆菌中表达并具有相应的酶活性。第二部分：探究了限氮、限磯及不同温度对转录水平及微拟球藻总脂含量、脂肪酸组成的影响。限氮处理组结果思示，Ｗｏ；化转录水平及油脂含量随限氮时间的延长而提高在

8、对脂肪酸组成的影响上，；氮缺乏可Ｗ抑制多不饱和脂，促进饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的合成肪酸的合成。限踞处理得到了与限氮；处理相同的结论。温度处理组结果显示，随温度的提高Ｗｏ化转录水平逐步提高，‘在２０Ｃ时油脂含量最高，在实验温度范围内，高温促进饱和脂肪酸的合成。一综上所述，本研究成功分离了微拟球藻条硫脂酶基因，通过