北虫草固体培养残基中多糖和虫草素高效提取与纯化研究

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1、？．．ｆｔ．街级：—！：话竭分类号、若知乂蓉Ｉ硕古研究生学位论文－北虫草固体培养殘基中多糖和虫草素高效提取与纯化研究Ｉ专业；植物学硏究方向：食品生物技术研究生；陈丽冰—指导教师：吴光旭教授＇ｉ－：？高妊研究员一—论文起止日期；２０１３年７月至２０１５年５月ｈｉｒＩ密级：：分类号硕±研究生学位论文北虫草固体培养残基中多糖和虫草素高效提取与纯化研究专业；植物学研究方向：食品生物技术研究生：陈丽冰？指导教

2、师；吴光旭教授高虹研究员１５５月论文起止日期：２０１３年７月至２０年Ｈｉｇｈｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅａｎｄｃｏｒｄｃｅｐｉｎ任ｏｍｙＣｏｒｄｙｃｅｐｓｍｉｌｉｔａｒｉｓｒｅｓｉｄｕｅｍｅｄｉｕｍｓＭａｏｒ：ＢｏｔａｎｊｙＤｉｒｅｃｔｉｏｎｏｆＳｔｕｄｙ：ＦｏｏｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＧｒａｄｕａｔｅＬ－ＳｔｕｄｅｎｔｉｂｉｎＣｈｅｎ：ｇＳｕｐｅｒｖ－ｉｓｏｒ：Ｐｒｏ

3、ｆ．ＧｕａｎｇｘｕＷｕ民ｅｓｅａｒｃｈｅｒ．Ｈｏ打ＧａｏｇＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓＹａｎｔｚｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＪｕｌｙ，２０１３１：ｏＭａｙ，２０１５摘要Ｃ一北虫草（ｗ命ｃｅ；ｗｗＺ化口曲件．仍ＪＺｉｗＡ），又名北冬虫夏草、阐虫草，是类传统的滋补中药材。北虫草有増强免，与著名的中药冬虫夏草有相似的药理活性。疫，，深受消费者喜爱北虫草目、抗肿瘤、抗疲劳等功效具有较高的药用价值前己实现了人工培养，包括液体培养和固体培养两种方式。当前大多数工厂化生

4、产北虫草的企业都是采用固体培养的方式。北虫草收获后，其残余固体培养基中仍富含菌丝，含有多种有效成分，如虫草多糖、虫草素等，但并没有成熟的工艺＇对其中的有效成分进行提取分离。目前，规模化人工培养北虫草所产生的大量废，弃培养料没有得到很好的利用，不仅造成资源的浪费也对环境造成危害。本研究选择北虫草固体培养残基为原料，采用闪式提取法对培养残基中多糖的提取工艺进行了优化，同时研究了北虫草固体培养残基中虫草素的超高压提取、膜分离一定的理论及高速逆流色谱纯化工艺，期望为全面开发利用北虫草培养残基提供依据

5、。主要研究结果如下：１．为了避免北虫草固体培养残基中的淀粉对虫草多糖含量测定结果的干扰，研－Ｈ究了ａ淀粉酶不同酶解溫度、酶解、酶添加量和酶解时间对淀粉去除的影响。ｐ°－ＩＳ６０５０ｉｎ：１６０Ｃ的条件下酶解Ｏｍ结果表明，（Ｘ淀粉酶在ｐＨ．、料酶比为、温度为时还原糖释放量趋于稳定，楓液检测无蓝色出现，即在此条件下可将北虫草固体培养残基的多糖提取液中淀粉去除。２．采用热水回流提取北虫草培养基中多糖，在料液比１：３０，９（ＴＣ条件下回流－－；化得到提取液入ａ淀粉酶和加入ａ淀粉酶进行了比较，结果发

6、，对提取液中不加－－－３．４８％．４２％，（Ｘ不加ａ现，不加ａ淀粉酶的多糖得率为８加淀粉酶的多糖得率为－２４２ａ－淀紛酶的多糖得率是加ａ淀粉酶的．倍，不添加淀粉酶去除样品中的淀粉将－造成多糖得率虚高，，淀粉酶排除虫草多糖，使得到的结果不准确因此需添加ａ一。测定时淀粉的干扰，为下步实验的顺利进行奠定了基础３．采用闪式提取对北虫草培养基中多糖进行提取，研究了液料比、提取时间、。结，转速对虫草多糖提取的影响，并利用正交试验法对工艺参数进巧优化果表明影响北虫草培养基中多糖闪式提取的各因素的主次顺序是转速影响

7、最大，其次是？提取时间，影响最小的是液料比方差分析可知，闪式提取的提取时间和转速对。北虫草培养基中多糖提取具有盈著影响。北虫草培养基中多糖的最佳提取工艺条件为３５：１，１２ｍｉｎ，８０００ｒ／ｍｉｎ，在此条件下得到的多糖得：液料比提取时间转速Ｉ１率为３．５２％。与热水回流提取相比，闪式提取多糖得率略高，只需在室温下进行，有效避免了长时间高溫提取对多糖结构的破坏，且提取时间由３ｈ缩短为１２ｍｉｍ节省了能耗，提高了效率。４．采用超高压法提取北虫草培养基中虫草素，研究了超高压压力、提取时间、

8、料液比、粉碎度和提取次数对虫草素提取率的影响。通过ＰＢ实验设计筛选影响虫草素提取率的显著因素。结果表明，超高压压力为４００Ｍ化、提取时间为１２ｍｉｎ、料液比为７０：１、粉碎度为２０目、提取次数为２次时提取虫草素较好。通过ＰＢ实一２＝验设计，虫草素得率Ｒ阶回归模型的拟合度８