副猪嗜血杆菌hxucba基因簇克隆表达及其免疫特性研究

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4、ｏｎ－ｎｐｒｏｄｕｃｔｓｉｎＨａｍｐｈｉｌｕｓＰａｒａｓｕｉｓＭ３ｓｔｒａｉ巧ＸｕｅｆｅｎＹａｈｇＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＰｒｏｆ．ＣａｏＳａｎｉｅｊＡｓｓｏｃｉａｔｅＰｒｏｆ．ＷｅｎＸｉｎｔｉａｎＹａａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ館文独创性声明本人帮重靑明：所呈巧的学位讫支是我个人在导师指导下进巧研究工作巧取．，得的成果．恩我巧知除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外学位论文中不包含其化个人或集体己经发表或溪葛过的巧巧成果＊化不恆含为获得四川农业大学一或其它教有机构的学位或证书巧使

5、用过的材料、与我同工作的同志对本研巧所巧的任何巧厳巧己在论文中作了巧确的说明并巧示了谢意＜＂劳ｆ；，職生签名；寺砰＞巧月Ａ曰巧论文使巧援权的声明川农业太学有美巧留、使用学位论文的规定：本人完全了解四＊即学校有权保留巧向国家有关部口戒机构送交论文的复巧件和电子版＜允许论文被查阅和借，汇編学泣论文。同意四川农业阔，可采用影印、缩印或巧描等度剝手段巧存大学可ｋ义巧不同方式在不同媒体上发表、传摧学位论文的全部威帮分巧容。＂Ｓ研究生签名：巧４砰心／年／月／〇曰导师签＞／５年月ｊ日《／摘要’由副猪

6、嗜血杆菌（Ｈａｅｍｏｐｈｌｉｕｓｐａｒａｓｕｉｓ，ＨＰＳ）引起的Ｇｉａｓｓｅｒｓ病已经给全球养猪业造成重大损失。铁几乎是所有生物体不可或缺的微量营养元素，它可＾＾＾乍为多种生物过程的电子受体或供体发挥作用一。血红素是细菌重要的铁源之ｈｘｕＣＢＡ基，由一因簇组成的ｈｘｕ血红素摄取系统是副猪嗜血杆菌获取铁源的途径之。本文通过对组成该系统的Ｈ个基因进行克隆表达，并分别对表达产物进行了生物信息学分析、免疫原性：、免疫保护性、抗血清杀菌等研究。主要研巧结果如下１．ＨＰＳｈｘｕＣＢＡ基因簇的克隆、鉴定及分析针对ＨＰＳｈｘｕ

7、Ｃ、ｈｘｕＢ、ｈｘｕＡ基因（组成虹Ｕ血红素摄取系统的基因）分别设一对引物，基因片段大小分别为２０６４ｂ、计（各基因片段中信号肤序列己去除）ｐ－１６１７ｂｐ、２８４７ｂｐ。通过ＰＣＲ的方法从ＨＰＳ四川Ｍ３分离株的基因组中扩增得到ｈｘｕＣ、－－－－－－ＭＤｈｘｕＢ、ｈｘｕＡ基因，分别构建ｐＭＤ１９ＴＣ、Ｐ１９ＴＢ、ｐＭＤ１９ＴＡ重组克隆质粒，王种质粒经测序鉴定显示突变碱基未形成终止密码子，与ＨＰＳＳＨ０１６５菌株的核昔酸一序列．％ｈｘｕＣ和ｈｘｕＢ基致性分别达９９．２２％、９９．１３％、９８１１，因序列无碱基缺失，

8、ｈｘｕＡ基因序列有６个碱基缺失。对邸ＳＨｘｕＣ、ＨｘｕＢ、ＨｘｕＡ氨基酸序列进行生物信息学分析，结果显示ＨｘｕＣ、ＨｘｕＢ、ＨｘｕＡ成熟期蛋白分别由６８８、５３９、９４９个氨基酸组