蜂胶黄酮pb3a对结肠癌细胞sw480中microrna表达水平影响的研究

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1、硕士研究生学位论文新疆大学论文题目:蜂胶黄酮PB3A对结肠癌细胞SW480中microRNA表达水平影响的研究研究生姓名：阿达莱提·麦麦提学科、专业：生物学研究方向：生物化学与分子生物学导师姓名职称：依米提·热合曼（副教授、博士）论文答辩日期2015年5月29日学位授予日期年月日本课题由国家自然科学基金委资助（31260280）MagisterialthesisTheinfluenceofPinobanksin-3-acetateonthemicroRNAexpressionincolorectalcancercellSW480ADissertationSubmitte

2、dtothecommitteeofXinjiangUniversityMasterDegreeCandidate:AdaletMuhemmedSupervisor:PhDYimitRahmanCollegeofLifeScienceandTechnology,XinjiangUniversitySubmittedtime:May2015新疆大学硕士研究生毕业论文摘要研究蜂胶黄酮PB3A（pinobanksin-3-acetate）对人结肠癌细胞SW480中RGS2和GEM基因转录和蛋白质表达水平的影响，初步探讨PB3A的抗肿瘤作用机制及其相关信号通路，验证前期所做的mR

3、NA基因芯片结果。探讨蜂胶黄酮PB3A对人结肠癌细胞SW480中microRNA表达水平的影响，获取筛选差异表达倍数2倍及以上的microRNA，通过靶基因预测网站得到差异表达倍数10倍及以上的microRNA靶基因，进一步在microRNA水平上探讨蜂胶黄酮PB3A抑制结肠癌SW480的分子机制。本研究包括以下两部分：1.蜂胶黄酮PB3A对结肠癌SW480中RGS2和GEM基因表达水平的影响以100µg/mL的蜂胶黄酮PB3A干预处于对数生长期的结肠癌细胞SW480，经24小时后，用倒置显微镜观察药物处理组与未药物处理的对照组细胞形态学变化、分别从实验组和对照组提取细

4、胞总RNA和细胞总蛋白并检测所提取的总RNA浓度与纯度。应用实时荧光定量RT-PCR技术，对标本中各个分子指标进行扩增，β-actin作为内参对照，绘制出标准曲线，检测药物处理组和未药物处理组SW480细胞内RGS2基因和GEM基因mRNA转录水平的变化。采用蛋白免疫印迹技术（WesternBlot）检测药物处理组和未药物处理组SW480细胞内RGS2基因和GEM基因的蛋白表达水平的变化，比较差异性。实时荧光定量RT-PCR结果显示，PB3A能够增加结肠癌细胞SW480中RGS2和GEM基因mRNA转录水平，与对照组相比，实验组中两条候选基因mRNA表达有极显著性差异（

5、∆Ct比较，P<0.01）。本实验中各基因mRNA表达的变化趋势与前期mRNA基因芯片结果一致，验证了芯片结果的可靠性。蛋白免疫印迹技术（WesternBlot）结果表明，PB3A能够增加结肠癌细胞SW480中RGS2和GEM蛋白表达水平。对照组中RGS2与β-actin相对灰度比为0.917±0.01，与实验组（2.318±0.02）比较，差异有统计学意义（P<0.05），而对照组中GEM与β-actin相对灰度比为（1.442±0.03），与实验组（2.168±0.02）比较，差异有统计学意义（P<0.05），表明结肠癌细胞SW480经PB3A药物干预后，两条基因均

6、在实验组中上调表达。本实验中各基因蛋白表达量的变化I新疆大学硕士研究生毕业论文趋势与实时荧光定量RT-PCR结果和前期基因芯片结果均一致，验证了芯片结果的可靠性与精确性。2.蜂胶黄酮PB3A对结肠癌SW480中microRNA表达水平的影响人结肠癌SW480细胞被蜂胶黄酮PB3A干预24小时后，分别从实验组和对照组提取细胞总RNA并检测其浓度与纯度。委托上海康城生物有限公司制作miRCURYTMLNAArray(v.18.0)(Exiqon)芯片，获得药物处理组和未药物处理组mciroRNA表达谱芯片，筛选出差异表达倍数为2倍及以上差异表达microRNA，通过靶基因预

7、测网站得到差异表达倍数10倍及以上microRNA的靶基因。采用miRCURYTMLNAArray(v.18.0)(Exiqon)芯片检测人结肠癌SW480细胞经蜂胶黄酮PB3A干预后的mciroRNA表达谱，采用图像分析软件对扫描图像进行数字化处理和分析，结果发现，实验组与对照组比较发现结肠癌细胞SW480中267条microRNA表达有显著性差异（取差异表达倍数两倍以上的microRNA），其中218条microRNA上调表达和49条下调表达，差异表达倍数3倍及以上的microRNA有129条，其中121条上调表达和8条下调表达，差异