atp调控小胶质细胞极化状态进而参与神经病理性疼痛的研究

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1、上海交通大学博士学位论文ATP调控小胶质细胞极化状态进而参与神经病理性疼痛的研究博士研究生：张昕学号：0127259309导师：江伟申请学位：博士专业：麻醉学研究方向：神经病理性疼痛资助基金项目：国家自然科学基金（81400803）培养单位：上海交通大学附属第六人民医院DissertationSubmittedtoShanghaiJiaoTongUniversityfortheDegreeofMasterTheModulationofATPonMicrogliaPolarizationinNeuropathicPain

2、Candidate：XinZhangStudentID:0127259309Supervisor：WeiJiangAcademicDegreeAppliedfor：DoctorSpeciality：AnesthesiologyDirection:NeuropathicpainAssistanceFundProject：NSFC(81400803)Institution:SixthPeople’sHospitalDateofDefence：May,2015ATP调控小胶质细胞极化状态进而参与神经病理性疼痛的研究中文摘要第

3、一部分神经病理性疼痛中脊髓小胶质细胞极化状态的变化情况及其对疼痛行为学的影响目的观测神经病理性疼痛大鼠脊髓小胶质细胞极化状态的变化情况及其对疼痛行为学影响（1）观测SNL神经损伤致神经病理性疼痛大鼠的疼痛行为学及其脊髓小胶质细胞的极化状态变化情况；（2）观测STZ致糖尿病性神经痛大鼠的疼痛行为学及其脊髓小胶质细胞的极化状态变化情况；（3）离体实验中，观测LPS、IL-4刺激诱导BV2小胶质细胞极化状态的变化情况；（4）离体实验中，观测LPS、IL-4刺激诱导原代小胶质细胞极化状态的变化情况；（5）鞘内注入经LPS、IL

4、-4孵育的原代小胶质细胞，观测大鼠疼痛行为学的变化。方法（1）观测SNL神经损伤致神经病理性疼痛大鼠的疼痛行为学及其脊髓小胶质细胞的极化状态变化情况IV选取6只大鼠行SNL术，术后用vonFrey纤维丝以up-down法推算大鼠的机械缩足痛阈值(PWT)两周，观测SNL神经损伤致神经病理性疼痛大鼠的行为学；另取18只大鼠随机分为3组（n=6）：分别为对照组、假手术组和SNL组。在术后第7天，急性分离脊髓腰膨大处的小胶质细胞，行流式细胞学检测，评估SNL大鼠脊髓小胶质细胞极化平衡的变化情况。（2）观测STZ致糖尿病性神经

5、痛大鼠的疼痛行为学及其脊髓小胶质细胞的极化状态变化情况选取6只大鼠腹腔注射STZ，术后定期测定大鼠血糖，并以vonFrey纤维丝以up-down法推算大鼠的机械缩足痛阈值(PWT)，为期4周，并设置相应对照组，观测STZ致糖尿病性神经痛大鼠的行为学；另取12只大鼠随机分为2组（n=6）：分别为对照组、STZ组。在术后第14天，急性分离腰膨大处脊髓中的小胶质细胞，行流式细胞学检测，评估STZ大鼠脊髓小胶质细胞极化状态的变化情况。（3）离体实验中，观测LPS、IL-4刺激诱导BV2小胶质细胞极化状态变化情况分别用LPS（1

6、mg/ml）、IL-4（20μg/ml）孵育BV2小胶质细胞24小时。实验细胞分为对照组、LPS组和IL-4组。以WesternBlot测定各组细胞中M1型小胶质细胞标记蛋白iNOS和M2型小胶质细胞标记蛋白Arg的蛋白表达情况；以流式细胞术测定各组细胞中M1型小胶质细胞标记蛋白CD86和M2型小胶质细胞标记蛋白CD206的蛋白表达情况；以免疫荧光共聚焦测定各组细胞中M1型小胶质细胞标记蛋白iNOS和M2型小胶质细胞标记蛋白Arg的蛋白荧光强度。（4）离体实验中，观测LPS、IL-4刺激诱导原代小胶质细胞极化状态变化情

7、况分别用LPS（1mg/ml）、IL-4（20μg/ml）孵育BV2小胶质细胞24小时。实验细胞分为对照组、LPS组和IL-4组。以WesternBlot测定各组细胞中M1型小胶质细胞标记蛋白iNOS和M2型小胶质细胞标记蛋白CD206的蛋白表达情况；V以免疫荧光共聚焦测定各组细胞中M1型小胶质细胞标记蛋白CD86和M2型小胶质细胞标记蛋白Arg的蛋白荧光强度。（5）鞘内注入经LPS、IL-4孵育的原代小胶质细胞，观测大鼠疼痛行为学的变化将经LPS诱导的以M1型为主的原代小胶质细胞和经IL-4诱导的以M2型为主的原代小

8、胶质细胞分别鞘内注射入正常大鼠体内，用vonFrey纤维丝以up-down法推算大鼠的机械缩足痛阈值(PWT)，观测大鼠疼痛行为学的变化情况；将经LPS诱导的以M1型为主的原代小胶质细胞和经IL-4诱导的以M2型为主的原代小胶质细胞分别鞘内注射入神经病理性疼痛大鼠体内，用vonFrey纤维丝以up-down法推算大鼠的机械缩足痛阈