金龟子绿僵菌内生性及对花生生长促进作用

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1、密级论文编号中囯农北科学院立论文金龟子绿僵菌内生性及对花生生长促进作用EndophytismandGrowth-PromotingofMetarhiziumanisopliaeduringPeanutDevelopment硕士研究生：刘少芳指导教师：农向群研究员申请学位类别：农学硕士专业：农业昆虫与害虫防治研究方向：害虫防治培养单位•.植物保护研究所研究生院2015年5月密级:论文编号:中国农业科学院学位论文金龟子绿僵菌内生性及对花生生长促进作用EndophytismandGrowth-PromotingofMetarhiziumanisopliaeduringPean

2、utDevelopment硕士研究生：刘少芳指导教师：农向群申请学位类别：农学硕士专业：农业昆虫与害虫防治研究方向：害虫防治培养单位：植物保护研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationEndophytismandGrowth-PromotingofMetarhiziumanisopliaeduringPeanutDevelopmentM.S.Candidate：LiuShaofangSupervisor：NongXiangqunMajor：AgricuturalEnt

3、omology&PestControlSpecialty:PestControlMay2015摘要金龟子绿僵菌（Metarhiziumanisopliae）用于防治农作物害虫，可与植物发生相互作用。已发现绿僵菌对一些植物有促生长作用和内生性。为探讨绿僵菌在防治花生蛴螬中对花生生长的影响及内生性，本文研究了施用绿僵菌对花生早期发育及整个生长期生长的影响，分析其花生根中的内生性，为确定绿僵菌的内生定植和定位还构建了egfp工程菌株。主要研究结果如下：1.绿僵菌对花生种子萌发和根早期发育的影响。花生播种时以浇灌和种衣方式施菌，检测播种后3d内种子萌发率和16d内主根长度及侧根

4、数，同时检测根际绿僵菌种群数量。结果表明，绿僵菌对种子萌发无影响（P>0.05）；种衣施菌对主根长度、侧根生长无影响（P>0.05），而浇灌施菌的主根长度、侧根数在4d-10d比对照显著增加（P<0.05）。两种施菌处理的根际绿僵菌种群在施菌后初始8d内呈现由小幅波动到缓慢下降趋势，8d-12d内明显下降，斜率分别为0.637和0.268。相关分析表明，浇灌施菌后4d-16d内的主根长度与对照的比值、侧根数与对照的比值均与绿僵菌群数量显著相关（P=0.0216，R=0.8273主根根长；P=0.0032，R=0.9213侧根数量）。说明绿僵菌能促进花生根早期发育，相比种

5、衣施菌，浇灌施菌是更适宜的施菌方式。2.绿僵菌对花生整个生长期生长的影响。设置花生播种期施菌和初花期施菌处理，每15d检测株高、株重等11个生长参数及根际绿僵菌种群数量。结果表明，初花期施菌的叶片数、下针数、好果数、地上和根及果干湿重显著（P<0.05）高于对照，播种期施菌与对照无显著差异（P>0.05）。相比播种期施菌，初花期施菌的根际绿僵菌有较高的定植率和增殖率，其种群高峰期菌量为初始量1.46倍，且与蛴螬种群高峰期吻合，防治蛴螬效果显著。播种期施菌的绿僵菌种群高峰期菌量为初始量0.69倍，与蛴螬种群错峰，防治蛴螬效果明显低于苗期施菌。因此，绿僵菌对花生生长有促进作

6、用，初花期施菌作用更为显著，且防治蛴螬效果更好。3.绿僵菌在花生根中内生性检测。根据菌株ITS序列和标记基因benA3序列，设计并筛选得到2对特异性引物，对目标菌株检测的灵敏度分别达到1:2000和1:1000。以两对特异性引物PCR和选择培养检测接种的花生根样品，结果从苗期施菌75d和90d的根样品中检测到特异DNA条带和目标菌落，证明了绿僵菌在花生根中内生定植。4.绿僵菌egfp工程菌株的构建。构建了以egfp为报告基因、苯菌灵抗性基因benA3为标记基因的Camben-eGFP表达载体，通过农杆菌介导转化绿僵菌菌株，经PCR和荧光显微检测证明egfp基因在转化菌株

7、中成功表达。egfp工程菌株为进一步确定绿僵菌在花生根中定植和定位分布奠定基础。关键词：金龟子绿僵菌，促生作用，植物内生性，绿色荧光蛋白，花生IAbstractMetarhiziumanisopliaecouldinteractwithplantswhenitwasusedforpestcontrolasabiocontrolagent.Ithasbeenreportedpromotingthegrowthofsomeplantsandbeinganendophyte.Theaimofthispaperistoexploretheeffe