马铃薯疮痂病菌分子检测技术的建立

《马铃薯疮痂病菌分子检测技术的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、类号：墨壑5：三2密级：坌珏单位代码：学号：100862010395马铃薯疮痂病菌分子检测技术的建立Studyonmoleculardetectiontechniquesofthepotatoscabpathogens学位申请人：郭凤柳指导教师：赵伟全教授刘大群教授学科专业：植物病理学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二零一三年六月一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰垦盎些盘堂或其他教育机构的学位或证书而

2、使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者躲锋恕坼签字嗍椰年‘月乡日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰垦壅些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盔些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：琊瓦柳导师签名：签字日期：为}易年6月≥曰签字日期：如I易年学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电

3、话：邮编：L>乙／、6月弓日摘要马铃薯疮痂病(Potatoscab)是马铃薯生产上的重要经济性病害，该病可由多种植物病原链霉菌(Steptomycesspp．)引起。由于其病原菌组成多样，给病原菌的检测带来较大困难。随着各种PCR技术的发展及在其他病害检测中的成熟应用，为探索马铃薯疮痂病原菌的分子检测方法提供了有益借鉴。本研究在前期获得的不同致病菌株基础上，通过筛选通用特异性检测引物和反应体系确立疮痂病菌的定性检测方法，并结合荧光定量PCR技术摸索病原菌的定量检测方法，所得结果如下：1．马铃薯疮痂病菌定性检测：根据疮痂病菌特有的毒素合成基因簇中的基因txtA、txtB、txtC(

4、刚5D)、txtD(以∞)序列设计引物，对选择的4个疮痂病菌模式菌株CPS．1(＆scabies)、CPS．2(＆galilaeus)、CPS．3(＆acidiscabies)和CPS．4(Sturgidiscabies)的基因组扩增，筛选到一个通用检测引物B1／B2，该引物对马铃薯疮痂病原链霉菌具有较高的特异性，同期测试的各非致病菌株均无目的条带。优化后反应体系对各模式菌株DNA的检测灵敏度为20pg／肛L，定量转换为菌株孢悬液的浓度后，不同测试菌株有效检测浓度CPS．1为2．48CFU／}tL，CPS．2为3．815CFU／此，CPS．3为4．035CFU／I．tL，CPS．

5、4为4．035CFU／pL。取样测试结果表明，该方法可用于疮痂病菌DNA、孢悬液、疮痂病斑组织及疮痂病土的定性检测，结果准确，灵敏度高。2．马铃薯疮痂病菌定量检测：根据通用检测引物B1／B2扩增获得的核苷酸序列设计荧光定量PCR引物，筛选到符合qPCR条件的引物RTAl／RTA2，经检测，其在各测试菌株中的扩增结果稳定，片段大小符合要求，并且无引物二聚体形成，可以作为qPCR检测引物。分别对4种测试菌株的孢悬液进行定量并提取DNA，稀释至不同浓度作为模板，利用qPCR技术建立标准曲线。利用建立的标准曲线对土壤样品及病组织样品进行测试，结果表明其可对样品进行定量测定。3．本研究中还

6、通过温室盆栽接种试验检测了导致马铃薯发病的菌株CPS．1的最低孢悬液浓度，浓度梯度测定结果表明，该菌株的最低发病浓度为7．35×103CFU／mL。关键词：马铃薯疮痂病；链霉菌；定性检测；定量检测StudyonmoleculardetectiontechniquesofthepotatoscabpathogensMastercandidate：GUOFeng-liuSupervisors：ZHAOWei-quanprofessorLIUDa—qunprofessorMajor：PlantPathologyAbstractPotatoscabiSanimportanteconomi

7、cdiseaseinpotatoproduction．SeveralplantpathogenicSteptomycessppmaycausethediseaseincertainenvironment．Duetothediversecompositionofthepathogen，itisdifficulttodetectthespecificpathogenquicklyindiseaseresearch．WiththedevelopmentofavarietyofPCRte