雷帕霉素在6-羟基多巴诱导的帕金森病细胞及大鼠模型中的神经保护作用及其机制研究

《雷帕霉素在6-羟基多巴诱导的帕金森病细胞及大鼠模型中的神经保护作用及其机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：燃日苏州大学学位论文使用授权声明Y2445630{蚴㈣㈣㈣本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图

2、书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口定。本学位论文属在——年一月解密后适用本规非涉密论文卣论文作者签名：蓝建经日期：!圣：翌：坐导师签名：经丝鲑日期：!壶：呈：绺雷帕霉素在6#k基多巴诱导的帕金森病细胞及大鼠模型中的神经保护作用及其机制研究中文摘要【目的】帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是中枢

3、神经系统变性疾病，线粒体氧化应激和神经元凋亡在PD的病理机制中发挥关键的作用。雷帕霉素(rapamycin)为雷帕霉素靶蛋Et(Targetofrapamycin，TOR)信号通路特异性抑制剂，在一系列神经系统变性疾病的病理机制及治疗中具有重要的意义。本研究通过雷帕霉素预处理PD大鼠及细胞模型，揭示其在PD中的神经保护作用，并探讨其机制。【方法】动物实验：实验SD大鼠随机分为假手术组、PD模型组、雷帕霉素低剂量组(0．05mg／kg／d)、中剂量组(0．5mg／kg／d)及高剂量红I(5mg／kg／d)进行雷帕霉素灌胃预处理。7天后，向模型组和所有雷帕霉素预处

4、理组大鼠脑部右侧纹状体两点定向注射6．羟基多E(6一hydroxydopamine，6-OHDA)(41．tg／gl，21上1／注射点)诱导建立PD大鼠模型，假手术组大鼠注射生理盐水作为对照。术后第25天各组大鼠均用阿扑吗啡(0．5mg／kg)诱导旋转试验，检测行为学指标；在造模后第28天，各组大鼠经心脏灌注固定，取脑组织进行黑质．纹状体酪氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase，TH)免疫组化染色及透射电子显微镜观察；检测各组SD大鼠中脑丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，S

5、OD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH．PX)活性；提取脑组织总RNA后，采用RT-PCR方法检测黑质．纹状体内Bax、Bcl．2和p47p№“等基因mRNA的表达；同时采用westemblot方法检测黑质．纹状体内Bax、Bcl一2、细胞色素c以及cleavedcaspase．9蛋白质的表达。体外实验：采用不同浓度6-OHDA诱导24h后检测PCI2细胞存活率，建立PD细胞模型。不同浓度雷帕霉素预处理PCI2细胞3h、6h、12h和24h，100pM浓度6-OHDA诱导24h后，使用CCK．8细胞计数试剂盒检测PCI2

6、细胞不同时间点的存活率。采用39M浓度雷帕霉素预处理6h，1001xM浓度6-OHDA诱导24h后，使用丙啶碘化物(Propidiumiodide，PI)单染试剂盒检测雷帕霉素对损伤PCI2细胞周期的影响。同时使用AnnexinV．FITC和PI双染试剂盒，通过流式细胞仪检测中文摘要雷帕霉素在6．羟基多巴诱导的帕金森病细胞及大鼠模型中的神经保护作用及其机制研究各处理组PCI2细胞凋亡的变化。雷帕霉素预处理6h，6-OHDA诱导lh后，使用含DCFH—DA荧光探针的试剂盒检测各处理组PCI2细胞中活性氧(reactiveoxygenspecies，Ros)的生成

7、。收集各组PCI2细胞，提取细胞总RNA，通过real—timeRT-PCR检测各处理组PCI2细胞内P47pho。、TH、血红素加氧酶．1(hemooxygenase．1，HO．1)和转录因子NF．E2相关因子2(transcriptionalfactorNF．E2．relatedfactor2，Nrf2)的mRNA表达。【结果】一、动物实验结果：(1)与模型组相比，各剂量雷帕霉素预处理组大鼠的旋转行为减轻0<0．05)。(2)与假手术组相比，PD模型组损伤侧黑质部位中T一细胞数量明显减少p<0．001)；与模型组比较，各雷帕霉素预处理组大鼠损伤侧TH+细胞

8、数量则明显增加仞<0．001)。(3)