硫化氢对人绒毛膜前列腺素代谢酶的调节及其机制

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1、第二军医大学硕士学位论文硫化氢对人绒毛膜前列腺素代谢酶的调节及其机制HydrogensulfideinvolvedintheregulationofPGDHinhumanchorionanditsmechanism研究生：孙倩倩导师：古航教授倪鑫教授培养单位：第二军医大学第一附属医院专业：妇产科学论文提交日期：2013年6月论文答辩日期：2013年5月二。一三年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表

2、或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：白确俑签字吼≯f≥年月；。日学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入《中国学位论文全文数据库》、《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》等数据库进行检索。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇

3、编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者虢白啊诵签字日期啊f≥年S月之JEt导师签名：签字日期：乙B年岁月孓Et目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1Abstrat．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．z4缩写词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7硫化氢对人绒毛膜前列腺素代谢酶的调节及机制的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯8前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8一日}J吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1O实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57在读期间发表的文章和参加科研工作

5、情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯64致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯65硫化氢对人绒毛膜前列腺素代谢酶的调节及其机制摘要早产在我国的发病率约为8．1％，其近远期并发症较多，给家庭和社会带来巨大的精神和经济压力，但由于人类分娩发动的确切机制尚未完全阐明，临床上仍缺乏预测和治疗早产的有效措施。分娩是一个多因素参与的复杂的生理变化过程，妊娠期间大部分时间子宫均处于静息状态，而至妊娠末期，子宫开始出现规律宫缩，并逐渐加强，最终促使胎儿娩出体外。且在该过程中，羊膜、绒毛膜、胎盘等宫内组织来源的前列

6、腺素(prostaglandin，PG)发挥重要作用。目前的研究显示：绒毛膜可高表达前列腺素代谢酶．NAD依赖的15．羟基前列腺素脱氢酶(15．hydroxyprosglandindehydrogenase，PGDH)，由于其处于羊膜和子宫肌之间，妊娠期绒毛膜高表达的PGDH构成一道前列腺素代谢屏障，调控胎膜PG到达子宫肌的量。本实验室前期研究提示分娩启动和H2S有相关性，但进一步的研究尚未进行。因此本课题首先以原代培养的人绒毛膜滋养层细胞为研究对象，首先确定原代培养的细胞中有CBS和CSE的表

7、达，且有产生内源性H2S的能力。然后明确H2S对PGDH表达和生物活性的调节作用，利用RNA干扰技术，进一步明确在人绒毛膜细胞中内源性H2S生成的关键酶。很多的研究发现：microRNA几乎参与了生物的所有病理生理过程，如发育、增殖、凋亡、癌变等，且2009年已经有研究报道，多种microRNA在分娩前后、早产临产前后有差异表达，这就提示我们microRNA参与了分娩启动这一生理过程，且在心血管系统，已经有研究显示，H2S可上调miR-133a的表达。为此，本课题进一步探讨了H2S调控PGDH的

8、microRNA机制。接下来，本课题首先构建了含有PGDH3’UTR双荧光报告基金的质粒及针对microRNA结合位点进行点突变的突变体质粒，利用双荧光报告基因检测系统明确不同microRNA对PGDH3’UTR是否有直接靶作用，并利用Westernblot方法探讨H2S是否可通过对以上microRNA的影响实现对PGDH的调节，并最终参与到对局部前列腺素浓度的调节中。最后我们在组织水平检测不同妊娠状态下，CBS、PGDH和不同microRNAs的表达变化情况，从细胞和组织两水平说明rnicro