应用实时荧光定量pcr的mirna芯片技术研究脂肪肉瘤的mirna表达差异谱

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1、万方数据复旦大学硕士学位论文橇里大学硕士学位论文应用实时荧光定量PCR的miRNA芯片技术研究脂肪肉瘤的miRNA表达差异谱TheMicroRNAexpressdifferencespectrumofLiposarcomabyusingEve——GreenbasedRT——PCRMicroRNAaSsay院系：复旦大学附属中山医院专姓业：外科学名：黄媛指导教师：陆维祺主任医师导师组成员：周宇红主任医师童汉兴主治医生完成日期：2013年4月7曰万方数据复旦大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．6实验部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11第一部分、MIRNAS表达差异谱的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯111、实验材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1l2、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．183、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35第二部分、8个MIRNAS的细胞验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．381、实验材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．382、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯423

3、、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．45参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．51附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．58致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．59文章及课题⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．60万方数据复旦大学硕士学位论文中文摘要应用实时荧光定量PCR的miRNA芯片技术研究脂肪肉瘤的miRNA表达差异谱背景与目的：软组织肿瘤(softtissuesarcomas，STS)是

4、一类很少见的肿瘤，具有多种组织类型。而在这些组织类型中最多见的是脂肪肉瘤。脂肪肉瘤发生在后腹膜，可以很长一段时间没有任何症状，脂肪肉瘤最大的特点就是易于复发，较少转移。根据2002年WHO对脂肪肉瘤的分类标准，脂肪肉瘤分为5个组织亚型，归类为3个生物学类型：1)高分化脂肪肉瘤和低分化脂肪肉瘤；2)粘液细胞型／圆型细胞型脂肪肉瘤；3)多形性脂肪肉瘤。去分化脂肪肉瘤、圆型细胞型脂肪肉瘤和多形性脂肪肉瘤被认为是恶性程度较高、侵袭性较强的种类；而粘液细胞型脂肪肉瘤及高分化脂肪肉瘤则被认为是低度恶性种类。手术的完整切除是现今治疗的基石。切缘

5、阴性(卜2cm)代表良好的结果，但是脂肪肉瘤大都发生于后腹膜，因此完整切除困难，更加大了复发的可能。目前化学疗法以及放射疗法多用于辅助治疗，但除了MLS／RCLS外疗效较差，因此现在急切需要发展新的靶向治疗方法。microRNAs(miRNAs)是一类含有18—24个核苷酸(nt)的单链RNA，负向调节靶向mRNAs的表达。MiRNAs的表达异常可以改变细胞的分化，引起肿瘤的发生、侵袭、转移和复发，miRNAs可以作为癌基因和抑癌基因存在，已经有多种靶向miRNA的抗肿瘤药物研发出来应用于临床，并且取得较好疗效。现今在脂肪肉瘤领域

6、，miRNAs的研究非常少，本研究用miRNA高通量芯片对25例脂肪肉瘤组织，18例脂肪肉瘤患者的正常深部脂肪组织(距离肿瘤边缘大于5cm)和16例脂肪瘤肉瘤旁组织(距离肿瘤边缘小于lcm)进行miRNA的筛选，分析脂肪肉瘤间的特异性miRNA表达差异谱，为未来的进一步探索与其相关的分子机制，寻找新的治疗靶点开发新药研究做铺垫。方法：应用基于实时荧光定量PCR的miRNA芯片技术，对25例脂肪肉瘤组织，18例脂肪肉瘤患者的正常深部脂肪组织(距离肿瘤边缘大于5cm)和16例脂肪瘤肉瘤旁组织(距离肿瘤边缘小于lcm)进行1920个mi

7、RNA的筛选，分析脂肪肉瘤问的特异性miRNA表达差异谱。应用实时荧光定量PCR对部分表达差异的miRNAs在脂肪肉瘤和脂肪细胞中的表达进行验证。结果：对荧光定量PCR芯片结果进行分析发现，脂肪肉瘤和正常深部脂肪组织的miRNAs表达差异：40个miRNAs在脂肪肉瘤中表达增高，21个miRNAs表达降低；脂肪肉瘤和瘤旁脂肪组织的miRNAs表达差异：121个miRNAs存在表达差异；瘤旁脂肪组织和正常深部组织的miRNAs表达差异：9个miRNAs在瘤旁脂肪组织中高表达，2个低表达；脂肪肉瘤各亚型之间miRNAs表达存在差异。通

8、过SVM方法得出8个miRNAs(has—miR一369—3p，has—miR一196a，has—miR一135b，万方数据复旦大学硕士学位论文has—miR一376b，has—miR一486—5p，has—miR一486—3p，has—miR一4