中华鳖figlɑ基因的克隆及其在性腺中的表达分析.pdf

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150101035上海海洋大学硕士学位论文中华鳖figlɑ基因的克隆及其在性腺中的表达题目：分析CloningandGonadalExpressionAnalysisof英文题目：figlɑGeneinChineseSoft-shellTurtle(Pelodiscussinensis)专业：水产养殖研究方向：种质资源与遗传育种姓名：赵岩岩指导教师：朱新平研究员徐红艳研究员二O一八年五月二十五日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声

2、明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海

3、海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注李桂峰中山大学教授主席刘丽华南农业大学教授委员朱华平珠江水产研究所研究员委员珠江水产研究所答辩地点答辩日期2018.5.28综合楼一楼会议室上海海洋大学硕士学位论文中华鳖figlɑ基因的克隆及

4、其在性腺中的表达分析摘要figlɑ（factorinthegermlinealpha）是bHLH（basichelix-loop-helix，碱性螺旋-环-螺旋）家族的一员，在动物的生殖发育调控过程中起着极为重要的作用，特别是在大部分脊椎动物的卵泡形成及卵巢发育中起着重要的调控作用。figla基因具有高度保守的bHLH结构域，已在部分脊椎动物中得到鉴定与分析。中华鳖（Pelodiscussinensis）是爬行类动物中较为普遍的种类，因其具有极高的药用和营养价值，导致其资源的过度开发利用及环境的恶化，致

5、使中华鳖种质退化严重。因此利用传统选育与现代细胞、基因工程等育种技术相结合的新方法进行良种培育已变得至关重要。生殖细胞是育种新技术研究的细胞基础，中华鳖生殖细胞发育分化的研究是进一步了解其生殖发育调控机制的前提。本论文以中华鳖为实验模型，对figla基因在其生殖细胞发育中的表达模式进行了初步分析，详细的工作内容如下：1.中华鳖figla基因的克隆及分析本研究克隆并分析了中华鳖figlɑ基因的部分cDNA序列，该序列长度为714bp，其中包含完整开放阅读框642bp，3’端非编码区72bp；共编码213个

6、氨基酸，包含一个高度保守的bHLH结构域。Figla氨基酸序列比对结果显示，其蛋白序列与西部锦龟同源性最高，达93%；此外，NJ系统进化树的分析结果显示，中华鳖Figlɑ蛋白与哺乳类、鸟类的聚为一支。2.中华鳖figlɑ的组织特异性分析半定量PCR和荧光定量PCR（qRT-PCR）结果表明：中华鳖figlɑ基因mRNA主要在卵巢和精巢中表达，其中在卵巢中表达较强，精巢中表达较弱，而在其它体组织中几乎不表达。3.中华鳖figlamRNA在卵巢中的表达分布情况由中华鳖卵巢组织的化学和荧光原位杂交结果可知：中

7、华鳖figlɑmRNA在卵子发生过程中的各期卵泡中均有信号，其中在初级卵母细胞（Ⅱ-Ⅴ期）中的信号最强，且主要定位在卵母细胞胞质中；在生长期卵母细胞（Ⅵ-Ⅸ期）发育至成熟卵母细胞（Ⅹ期）的过程中，figlɑmRNA分布在卵母细胞胞质及其外周的滤泡细胞中，且在卵母细胞胞质中的信号逐渐减弱，在滤泡细胞中的信号逐渐增强。研I上海海洋大学硕士学位论文究结果表明figlɑ基因可能主要调控中华鳖卵泡形成及卵巢的发育。4.中华鳖figlamRNA在精巢中的表达分布情况中华鳖figlamRNA在精子发生中各时期的细胞中

8、表现出动态的变化。中华鳖figlɑmRNA在精母细胞和精子细胞中的信号较强，在精原细胞中的信号较弱，在体细胞中几乎检测不到信号。研究结果表明figlɑ基因可能在精母细胞和精子细胞发育过程中也起到一定的调控作用。综上所述，figlɑ基因可作为中华鳖卵泡和卵母细胞发育的关键基因，参与调控卵泡的形成及卵巢发育，同时可能在中华鳖精子发生过程中也起到一定的调控作用。本研究为进一步开展中华鳖及其它爬行动物的配子生成、性腺发育与分化等研究奠定了基础。关键