小麦E3基因的克隆及其在叶锈菌侵染过程中的表达分析.pdf

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1、小麦E3基因的克隆及其在叶锈菌侵染过程中的表达分析CloningandexpressionofE3geneintheprocessofwheatinfectedbypucciniatriticina学位申请人：张韫玮指导教师：王冬梅教授学科专业：植物学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年五月三十一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰垦盔些盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究

2、所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇堡壅些盘堂．有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盔些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字FI期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：邮编：电话：本项研究工作是在前期工作的基础上开展的。本实验室阎爱华等【

3、l】构建了叶锈菌小种366侵染小麦近等基因系TcLrl9早期不同时间点的SSH文库。从中筛选出的死鄙EST在叶锈菌侵染后16h高量表达。已有研究表明，在高温或低温胁迫下，植物某些蛋白会发生错误折叠，如果这些蛋白积累就易引起病变。具有E3活性的AtCHIP蛋白就是通过调控Hsp70、Hsp90蛋白的表达，重叠修复或降解某些异常蛋白，减少了环境胁迫对植株的损害【2】。本试验以小麦近等基因系TeLrl9和叶锈菌小种366为材料，利用RT-PCR技术克隆得到TaE3基因的全长，通过实时荧光定量PCR和WesternBlotting技术检测小麦被叶锈菌侵染后不同时间点的TaE3表达特征，并通过构建真

4、核表达载体，利用农杆菌转化技术转化拟南芥，得到过表达TaE3基因的拟南芥纯合体植株。获得的主要结果如下：1．利用RT-PCR技术从小麦幼苗叶片中克隆获得了TaE3基因的全长。．2．构建了原核表达载体，获得大量TaE3融合表达蛋白，通过免疫新西兰兔，获得高效价的兔抗血清，并证明该血清与TaE3融合蛋白呈特异结合。3．通过qRT-PCR和WesternBlotting技术检测了TaE3基因在小麦被叶锈菌侵染后不同时间点的表达量变化。结果表明，该基因在RNA水平的表达量在8h之前几乎没有变化，但在16h表达量很高且达到峰值；在蛋白水平的表达量在8h开始增加，16h表达量最高，而在24h又有所回落

5、，48h接近对照。初步表明该基因可能参与了小麦抵抗叶锈菌侵染的防卫反应表达过程。4．构建了pCAMBIAl300—35S：：TaE3．eYFP的真核表达载体，运用农杆菌转化拟南芥技术获得TaE3基因的过表达纯合体植株。以上结果为进一步研究和探讨TaE3在小麦与叶锈菌互作过程中的作用及其机制奠定了试验基础。关键词：小麦近等基因系TcLrl9；E3泛素蛋白连接酶基因；qRT-PCR；WestenBlottingCandidate：ZhangYunweiSupervisior：ProfessorWangDongmeiSpecialty：BotanyAbstract’IhisresearchiSb

6、asedontheformalstudies．Yaneta1．hadestablishedaSSHlibraryofthereactionbetweenthewheatandleafrust,fromwhichthe强E3ESTwasselected．AndthisESThasahighexpressionlevelinthewheatleavesat16hoursaftertheinoculationofleafrust366．neformalstudieshaveindicatedthatinthestressofhighorlowtemperature，someoftheprotei

7、nsinplantswouldhavefaultenfolding，whosoaccumulationwouldresulttOdeceases．Forinstance，theAtCHIPproteinwhichhastheactivityofE3isrepairinganddigestingtheabnormalproteinsbyoperatingtheexpressionofHsp70andHSP90，andthe