亚急性瘤胃酸中毒对瘤胃、瓣胃上皮细胞增殖与凋亡的影响

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1、分类号S852.3学校代码10129UDC11.220学号2010201052亚急性瘤胃酸中毒对瘤胃、瓣胃上皮细胞增殖与凋亡的影响EffectsofSubacuteRuminalAcidosisonProliferationandApoptosisofRumenandOmasumEpithelialCell申请人：邬宇航学科门类：农学学科专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物与免疫学指导教师：刘大程副教授胡红莲研究员论文提交日期：二〇一三年六月摘要本研究选取8只体况良好关中奶山羊做为试验动物。按体重相近原则随机分为三组：对照

2、组（n=2）、亚急性瘤胃酸中毒（Subacuteruminalacidosis，SARA）组（n=3）和恢复组（n=3）。对照组饲喂基础日粮（NFC/NDF=1.02），SARA组和恢复组通过饲喂非纤维性碳水化合物与中性洗涤纤维比（NFC/NDF）为1.02(Ⅰ期)、1.24(Ⅱ期)、1.63(Ⅲ期)、2.58(Ⅳ期)的4种日粮诱导奶山羊发生SARA，恢复组试验动物待SARA诱导成功后自由采食青干草4周。每期试验期结束进行屠宰，取瘤胃、瓣胃上皮组织。（1）通过饲喂日粮不同NFC/NDF比诱导试验动物发生SARA，测定瘤胃p

3、H值、挥发性脂肪酸、乳酸及干物质采食量（Drymatterintake，DMI）变化来评价SARA模型的建立。结果表明，当日粮NFC/NDF比达2.58时，瘤胃pH值在5.5～5.2之间持续时间长达7.58h/d，奶山羊发生SARA，瘤胃总的挥发性脂肪酸和丁酸浓度显著增加(P<0.05)，丙酸浓度增加(P>0.05)，乙酸浓度升高(P<0.05)，整个试验过程乳酸的含量一直较低(P>0.05)。（2）通过HE染色、显微镜、透射电镜等技术对瘤胃、瓣胃黏膜进行观察，来研究SARA对瘤胃、瓣胃黏膜上皮形态结构的影响。结果显示，瘤

4、胃乳头高度、宽度及角质层厚度均以SARA组最低，瓣胃角质层和粘膜肌层厚度也均以SARA组最低。透射电镜观察结果显示：SARA组与对照组及恢复组相比，上皮细胞微绒毛排列不整齐，线粒体肿胀、核固缩、染色质边集化，有较多的凋亡小体形成。（3）通过测定瘤胃、瓣胃上皮蛋白质、DNA、RNA、细胞增殖核抗原（ProliferatingCellNuclearAntigen，PCNA）的表达及细胞凋亡指数来研究SARA对瘤胃、瓣胃上皮生长、增殖与凋亡的影响。结果显示，SARA明显降低了瘤胃上皮蛋白质、DNA及RNA含量，对瓣胃上皮的上述指

5、标均未产生明显影响；SARA使瘤胃和瓣胃上皮细胞PCNA指数显著降低并对上皮细胞的增殖表现抑制作用；SARA使瘤胃和瓣胃上皮细胞的凋亡指数显著增高并促进细胞凋亡。（4）通过测定瘤胃、瓣胃上皮ATP酶的活性来研究SARA对瘤胃、瓣胃上皮ATP++2+2+酶的影响。结果显示，SARA抑制了瘤胃、瓣胃上皮Na-K-ATP和Ca-Mg-ATP++酶活性，恢复组显著高于SARA组但显著低于对照组；瓣胃上皮Na-K-ATP和2+2+Ca-Mg-ATP酶活性均以SARA组最低，恢复组最高。综合上述：SARA不仅影响了奶山羊瘤胃、瓣胃黏膜

6、上皮的形态结构，而且抑制上皮细胞增殖，促进上皮细胞凋亡，这可能在SARA引起瘤胃黏膜屏障功能受损机制中起重要作用。关键词：亚急性瘤胃酸中毒；细胞凋亡；增殖性核抗原；屏障功能EffectsofSubacuteRuminalAcidosisonProliferationandApoptosisofRumenandOmasumEpithelialCellAbstractEighthealthyGuanzhongdairygoatswereselectedasexperimentalanimalsandwererandomlyal

7、locatedtothreegroupsbasedonbodyweight,milkyieldsimilarprinciples:controlgroup、SARAgroupandrecoverygroup.Controlgroupdairygoatswerefedbasaldiet，SARAgroupdairygoatswerefeddietswithdifferentNFC/NDFratios，whichwere1.02、1.24、1.63、2.58respectively.Meanwhile,subacuterumi

8、nalacidosis(SARA)wasinducedbygraduallyincreasingdietaryNFC/NDFratios;recoverygroupwerefedhayfor4weeksaftersuccessfulinductionofsubacuteruminalacidosis.D