膜荚黄芪和大豆苯丙氨酸解氨酶基因的克隆及在毕赤酵母中的分泌表达

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1、⑧万方数据指导教师签名：论文评阅人1：自叁盘i,平INA2：翅圃威评阅人3：丕盘邀评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：应基良委员1：耻聋一．——委员2：壑丛：皇委员3：翻聋一委员4：一委员5：答辩日期：塑!坌：芝：2万方数据Author’Ssignature：一‘■o[Supervisor7Ssignature：Thesisreviewer1：Thesisreviewer2：Thesisreviewer3：Thesisreviewer4．Thesisreviewer5：Chair：(Commiaeeoforald

2、efence)Committeemanl：Committeeman2：Committeeman3：Committeeman4．Dateoforaldefence：忑磊磊一一一万方数据本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：秫健蕉．签字日期：≯

3、件年弓月订日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：永1惹鬣．签字日期：如峰年>月以日聊虢确辑签字日锄f纱年3月莎日万方数据浙江大学硕士学位论文致谢在杭州的这两年，虽然经历了很多波折，但因为这里的经历，我成长了很多。我喜欢这里的风景，感激在这

4、里遇到的人。首先，要感谢我的导师王首锋老师。刚进实验室的时候，王老师手把手得教我实验技术，他的认真和耐心让我感动。王老师平易近人，他对我的科研，学习和生活提供了很大的帮助，尤其是在这篇毕业论文的完成过程中，无论是前期的选题，实验材料的准备，实验方案的制定，还是后期实验的具体实施，这些都离不开王老师的指导和支持。特别要感谢的是在最后一学期，王老师给我足够的时间去找工作。值此论文完成之际，向王老师致以衷心的感谢。在我们实验室里，有个人，她很cool，她就是夏永琴师姐。夏师姐在不惑的年纪来到实验室，她的勤学好问精神让我

5、自愧不如。夏师姐让我坚定了活到老学到老的信念。感谢夏师姐平时给我的母亲般的关心和照顾。夏师姐是我读研期间的宝贵财富，就算以后年华逝去，青春不再，我也可以向夏师姐一样活得精彩。在隔壁实验室，有一群朋友，他们给了我关心，鼓励和帮助。我想借此感谢一下他们。感谢刘悦，谢文平，费云舟，李荣荣，魏笑莲，沈萨，郭斐，吕小妹，顾佳黎，刘敏，陆文强，姜灵等同学，谢谢你们。在宿舍里，我结识了6位室友，有文有理有工，我们的专业彼此不同，楼长称我们为“联合国”。不同的专业背景，不同的文化背景，让我们彼此互补，彼此取长补短，彼此成长。谢谢

6、潘雯雯，袁钦钦，裘思思，季芳琴，李国英，张倩。在杭州，在浙大，在西溪，遇到你们真好。最后，感谢我的家人，感谢你们这些年来的支持和鼓励，你们永远是我坚强的后盾。张健慧2014年1月于浙大西溪校区万方数据浙江大学硕士学位论文摘要L-苯丙氨酸(L-phenylalanine)，作为人体必需的氨基酸之一，在食品工业中，主要用作新型食品添加剂阿斯巴甜(Aspartame，L—Asp-L-Phe—Me)的合成原料。随着世界市场每年对阿斯巴甜需求量的增加，L．Phe的合成工艺已成为当前生物化工领域研究与开发的热点。利用苯丙氨酸

7、解氨酶(phenylalanineammoma．1yase，PAL，E．C．4．3．1．5)的逆向催化特性来生产L．Phe是一条主要的路线，关键问题在于怎样低成本而又高效地获得苯丙氨酸解氨酶PAL。本研究在毕赤酵母GSll5和大肠杆菌BL21中构建了PAL基因工程菌，期望通过微生物发酵实现苯丙氨酸解氨酶PAL的工业化生产。研究结果如下：1)克隆到了来自膜英黄芪和大豆的PAL基因的ORF2)构建了克隆载体pUCm．T-PAL并转化到了大肠杆菌DH5a中3)PAL基因的生物信息学分析结果利用DNAStar软件和NCB

8、I对测序序列进行分析，结果如下：来自于膜英黄芪的基因ORF长度为2157bp，编码718个氨基酸，蛋白相对分子质量为78KD，等电点为6．04，所扩增到的基因其核酸序列及氨基酸序列均与膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶EF567076．1有99％的一致性；来自于大豆的基因ORF长度为2142bp，编码713个氨基酸，蛋白相对分子质量为77．6KD，等电点为6．31，所扩增到的基因其核