紫蛇尾(ophiopholis+mirabilis)多糖的提取、纯化及生物活性研究

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1、烟台大学硕士学位论文学号：200907304004分类号：P735硕士学位论文紫蛇尾（Ophiopholismirabilis)多糖的提取、纯化及生物活性研究研究生姓名：张慧指导教师：郭承华学科门类：理学专业名称：海洋生物学论文提交日期：2012年4月2日烟台大学学位论文原创性声明和使用授权说明II烟台大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标

2、明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：年月日学位论文使用授权说明本人完全了解烟台大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在非保密的论文范围内，学校可以公布论文的部分或全部内容。（保密论文在解密后遵守此规定）论文作者签名：导师签名：日期：年月日III烟台大学硕士学位论文摘要本论文以黄渤海交界处长岛海域的紫蛇尾作为实验材料，采用正交实验法优化了紫蛇尾多糖的提取工艺，测定了紫蛇尾粗多

3、糖的脱蛋白工艺，并对紫蛇尾多糖理化性质进行了测定，研究了紫蛇尾多糖的分离纯化，以及紫蛇尾粗多糖的部分生物活性，包括：抑菌活性，抗氧化活性以及对心肌细胞的保护作用，为紫蛇尾资源的开发利用提供必要的理论依据。4采用L9(3)正交实验法，以多糖产率为指标，研究提取温度、提取时间、料液比、提取次数4个因素对提取工艺的影响。以正交实验的实验结果为条件建立多元线性模型，结果表明：对紫蛇尾多糖得率影响最大的因素是温度，其次是提取次数、提取时间和料水质量比。本实验得出的最佳提取工艺条件为：料水质量比1∶20，温度70℃，提取时间4h，提取次数4次。结果可信，说明紫蛇尾多

4、糖的产率和提取工艺相关因素有显著的相关关系。采用实验中常用的Sevag法，酶法，以及酶-Sevag法联用三种方法，进行脱蛋白比较。实验结果表明，酶-Sevag法联用是脱除紫蛇尾中粗多糖中蛋白质最为有效的方法。采用传统的水提和碱提法得到两种紫蛇尾多糖粗品，测定这两种紫蛇尾粗多糖的的部分常规理化性质，并对其进行分离纯化。采用改进的平板菌落计数法测定紫蛇尾粗多糖是否具有抑菌活性以及对不同醇沉浓度的粗多糖进行了抑菌活性的比较，并采用滤纸片法对上述实验结果进行了验证。采用改进的琼脂稀释法测定了紫蛇尾粗多糖的最低抑菌浓度。研究结果表明所提取的6种紫蛇尾粗多糖均具有抑

5、菌活性。采用化学方法测定紫尾粗多糖的抗氧化活性，其中包括对紫蛇尾粗多糖的还原能力的测定，对超阳离子和羟基离子的清除能力的测定以及抑制红细胞膜脂质过氧化能力的测定。研究结果表明，紫蛇尾粗多糖具有较强抗氧化能力，能有效的清除羟自由基、超氧阴离子，抑制红细胞膜脂质过氧化，且其抗氧化能力与剂量成正相关性。采用过氧化法构建了心肌细胞H9c2的氧化模型，测定了紫蛇尾粗多糖对H9c2氧损伤的保护作用，以及对由氧损伤引起的H9c2细胞凋亡率、线粒体膜电位、BCl-2、Bax表达、AKT细2+胞通路的影响，以及对缺氧心肌细胞内Ca浓度的影响。研究表明紫蛇尾粗多糖在较低的浓

6、度下均能对由氧损伤引起的H9c2细胞凋亡率、线粒体膜电位、BCl-2、Bax表达、AKT细胞通路，2+以及缺氧心肌细胞内Ca浓度产生明显的影响。关键词：紫蛇尾；多糖；提取工艺；脱蛋白工艺；分离纯化；理化性质；抑菌活性；抗氧化活性；对心肌细胞的保护作用IV烟台大学硕士学位论文AbstractInthispaper,OphippholismirabilismirabilisfromtheChangdaoArchipelagowereusedastheexperimantalmaterial.Theextractionprocessofpolysacchari

7、dewasoptimizedbytheorthogoralexperiment.Theproteinremovalingprocess,thephysicalandchemicalproperties,theseprationandpurificationprocessandpartofbiologicalactivity,including:theantibacterialactivity,theantioxidantactivityandtheprotectionofmyocardicalcellswerealsodetermined.Allofth

8、eseprovidethenecessarytheoreticalbasisfo