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《转病毒来源发夹rna小麦表现对大麦黄矮病毒的抗性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、HEREDITAS(Beijing)2007年1月,29(1):97―102ISSN0253-9772www.chinagene.cn研究报告DOI:10.1360/yc-007-0097转病毒来源发夹RNA小麦表现对大麦黄矮病毒的抗性燕飞,张文蔚,肖红,李世访,成卓敏中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100094摘要:将大麦黄矮病毒GPV株系的复制酶基因片段和CP基因片段构建成可在植物细胞内表达含有双链复制酶RNA(茎)和反义CPRNA(环)的复合发夹RNA结构,希望能
2、够诱发植物体针对病毒的RNA干扰作用,从而达到抗病毒目的。利用基因枪法将该结构导入小麦幼胚愈伤组织细胞后,通过在幼苗再生阶段进行以叶片为模板的快速PCR来加速阳性植株的筛选过程,最终共获得基因组整合有外源基因的小麦再生植株21株。对再生植株接种不同剂量的病毒,其中9株对BYDV-GPV有低度抗性,表现在低接毒量时无症状,接毒量提高时发病且严重;6株具中度抗性,表现在低接毒量时无症状,接毒量提高时局部有不严重症状;6株具高度抗性,两种情况下均无症状。抗性实验结果表明,hpRNA介导对BYDV的抗性可能受
3、到BYDV含量的影响,具有剂量效应的特点。关键词:发夹RNA;RNA干扰;大麦黄矮病毒;转基因;小麦Transgenicwheatexpressingvirus-derivedhairpinRNAisresistanttoBarleyyellowdwarfvirusYANFei,ZHANGWen-Wei,XIAOHong,LIShi-Fang,CHENGZhuo-MinStateKeyLaboratoryforBiologyofPlantDiseasesandInsectPests,Institute
4、ofPlantProtection,ChineseAcademyofAgriculturalSci-ence,Beijing100094,ChinaAbstract:AnexpressionvectorexpectedtoinduceRNAinterferenceagainstBarleyyellowdwarfvirus(BYDV),whichexpressedacompositehpRNAwiththedsRNAstemhomologousofBYDVGPVreplicasegeneandthean
5、tisenseRNAloophomologousofcoatproteingene,wasdesignedwithoutmarkergene.Thevectorwastransferredintocalluscellsfromwheat(TriticumaestivumL.)immatureembryosbyparticlebombardment.Toselectthepositivetransformantsasearlyaspossible,arapidPCR,whichdoesnotneedex
6、tractwheatDNAinsteadoffewleaves,wasusedatregenerationstageofplantlets.Totally21plantsprovedtocontainaliensequence.Antivirustestwithhighdoseinfectedvirusrevealedthat,9plantsshowedlowlevelofresistancetoBVDV,6plantsshowedmoderateresistanceand6plantsshowedh
7、ighlevelofresistance.Interestingly,bothlowandmoderatelevelsofresistanceplantswerenosymptomswheninfectedbyvirusesatlowdose.Itsuggeststhedose-dependenteffectoftheresistancemediatedbyhpRNAtoBYDV-GPV.Keywords:hairpinRNA;RNAinterference;Barleyyellowdwarfviru
8、s;transgenic;wheatRNA干扰(RNAinterference,RNAi)是多种生物nt)的小干扰RNA(smallinterferingRNA或shortin-体内由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)介导terferingRNA,siRNA)。siRNA与蛋白复合物结合后的同源mRNA降解现象。在细胞中,长的dsRNA被类形成RNA诱导沉默复合物(RNA-in-ducedsilencing似RNaseⅢ的Di
