辛伐他汀对人牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：氍莹导师签章：渺二级学院签芦J弓年弓研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果，指导教师对此

2、进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：勘耋导师签名：i蜴窍加f≥年弓月矽Et目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文辛伐他汀对人牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·8一刖百⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··12附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··19结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一23参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23综述辛伐他汀的作用机制和临床应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·32个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33中文摘要辛伐他汀对人牙髓细胞增殖及碱性磷酸奠活性的影响摘要目的：本试

4、验采用体外细胞培养的方法，探讨辛伐他汀对体外培养人牙髓细胞(humandentalpulpcells，HDPCs)的细胞增殖、矿化、细胞周期及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法：选择年龄为18．28岁新鲜拔除的健康、完整、无龋、无隐裂的恒牙或第三磨牙(河北医科大学第二医院口腔外科提供)。采用组织块酶解法培养细胞。待细胞长出后在倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况。细胞传代成功后，取第4代对数生长期人牙髓细胞进行细胞爬片，用SABC法进行波形丝蛋白和角蛋白免疫组织化学染色，鉴定细胞来源。MTT比色法检测辛伐他汀对人牙髓细胞增殖能力的影响：1)选用第4代生长良好的牙髓细胞，制

5、备lxl04+／ml的细胞悬液，接种于96孔板，每孔100lxl。2)细胞长满孔底后，弃去孔中的培养液，用PBS浸洗细胞。3)实验分为对照组、空白对照组和实验组，每组设5个孔。对照组：在有细胞的孔内加入1501xl完全培养液(含2％胎牛血清的高糖DMEM培养液)。空白对照组：在无细胞的孔内加入150“1的完全培养液。实验组：在有细胞的孔内分别加入150p,1用完全培养液配制的终末浓度分别为lO。9mol／L，10。8mol／L，100n101／L和10。6mol／L的辛伐他汀溶液。4)分别培养至第ld、5d时，弃孔中培养液，以PBS冲洗，在所需检测的培养孔内每孔加入四甲基

6、偶氮唑盐(MAT)溶液(5mg／mL)20止，37。C下继续孵育4h，终止培养，吸弃孔内上清液，在每孔分别加入1001xL二甲基亚砜(DMSO)，室温下轻微振荡5min。以空白对照孔调零，选择492nlil波长，在酶标仪上检测各孔吸光度值(A)。检测辛伐他汀对人牙髓细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响：1)选用第4代生长良好的牙髓细胞，制备1x104个／mL的细胞悬液，接种于96孔板，每孔1001A。2)等细胞长满孔底后，弃去孔中的培养液，用PBS浸洗细胞。3)实验分为对照组、空白对照组和实验组，每组设5个孔。对照组：在有细胞的孔内加入150pl完全培养液(含2％胎牛血清的

7、高糖DMEM培养液)。空白对照组：在无细胞的孔内加入1501．tl的完全培养液。中文摘要实验组：在有细胞的孔内分别加入150lxl用完全培养液配制的终末浓度分别为10。9mol／L，10～mol／L，10。7mol／L和10。6mol／L的辛伐他汀溶液。4)分别继续培养至第1d、5d时，弃孔中培养液，用PBS冲洗，每孔加入50止(19／L)的TritonX一100，4。C过夜，在镜下观察细胞完全裂解后，每孔分别加入ALP底物混合液100btL，培养箱内37"C孵育30min，以O．5mol／L氢氧化钠液终止反应，在室温中振荡5