脂质体转染制备转基因鹌鹑的研究

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1、分类号：密级：学号：2010108005单位代码：10759石河子大学硕士学位论文脂质体转染制备转基因鹌鹑的研究学位申请人李艳指导教师赵宗胜申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向动物遗传资源利用与分子育种所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2013年6月StudyonthePreparationofTransgenicQuailsbyLiposomeTransfectionADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsFortheDegreeof

2、MasterofAgricultureByLiYan(UtilizationofAnimalGeneticResourcesandMolecularBreeding)DissertationSupervisor:Prof.ZhaoZong-shengJune,2013ShihezixinjiangChina摘要转基因禽类具有广泛应用前景，比如可以作为医用动物模型和生物反应器。目前，制备转基因家禽的方法有电转染法、反转录病毒法和脂质体转染法。经过分析各方法优缺点，拟采用脂质体转染胚盘细胞的方法探讨制备转基因鹌鹑的可行性，初步构建转基因鹌鹑的模型，为寻求制备转基因鹌鹑的最佳方法提供实验

3、依据和基础。具体实验结果如下：（1）通过胚盘下腔注射的方法将经脂质体包裹的外源质粒pEGFP-C2转染胚盘细胞，质粒与脂质体lipofection-2000的最适包装比为1:2.5（μg:μL），在此浓度下，进行凝胶阻滞电泳质粒不会从脂质体中溢出。经过对胚盘进行甲醛固定操作，观察到注射的溴酚蓝存在于胚盘下腔中。（2）将处理后种蛋入孵到第6天，取出胚胎，经基因组PCR验证，检测到胚胎组织中存在pEGFP-C2质粒。说明本实验的注射方法可以将外源DNA注射入X期鹌鹑胚盘下腔中，并成功转染胚盘细胞。（3）对转基因后代的验证结果表明1只7日龄G0代鹌鹑的内脏组织中检测到肌胃和腺胃中有外源基

4、因表达，测序结果与原序列比对正确；1只成年G0代转基因母鹌鹑的部分内脏组织中表达了绿色荧光蛋白；2只G0代转基因鹌鹑的外表可观察到绿色荧光蛋白的表达；3只G0代转基因鹌鹑分别与野生型鹌鹑杂交其后代遗传外源基因的阳性率分别为33.96%，20.59%，10%，3只G0代转基因鹌鹑之间进行杂交其后代遗传外源基因的阳性率分别为10.87%，42.86%。综上所述，通过脂质体转染方法将外源DNA导入鹌鹑的胚盘下腔，可成功制备转基因鹌鹑个体；通过杂交分析，得到转基因G1代，说明转入的目的基因可以遗传给后代。关键词：脂质体转染；胚盘细胞；组织切片；荧光检测；转基因鹌鹑；杂交分析IIAbstra

5、ctTransgenicavianhasabroadprospect,canprovidehumanswithhighyieldandqualityofmeatandeggprotein,providesbiomedicalandhealthcareofproteinandbreedingfordiseaseresistance.Atpresent,preparationtransgenicpoultryofmethodhaselectrictransfectionmethod,reversetranscriptionvirusandliposometransfectionmeth

6、od,afteranalysisdiscussionandcombinedwiththeactualsituationofourlaboratory,weusedliposometransfectionblastodermcellstoconfirmthefeasibilityofpreparingtransgenicquail,preliminarybuildingtransgenicquailofmodel,providingexperimentalbasisandfoundationforthebestmethodforproducingtransgenicquails.Th

7、eresultsareasfollows:TranslatingthepEGFP-C2plasmidintothesubgerminalcavitybyliposometransfectionblastodermcells,thepackingratioofplasmidandliposomelipofection-2000optimalis1:2.5(μg:μL),theplasmidinliposomewillnotoverflowbygelretardation