microrna-376c靶向调控tgfa抑制骨肉瘤细胞增殖与转移的研究

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1、中图分类号UDCMicro博士学位论文学校代码密级105337弓葶靶向调控TGFA丰[p韦iJ骨肉瘤细胞增殖与转移的研究MicroRNA．妁鬻nhibitsCellProliferationandInvasioninOsteosarcomabytargetingtoTGFA；，作者姓名：金一学科专业：临床医学研究方向：、外科学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：彭丹教授中二O答辩委员会主席原创性声明本人声明≯所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究t，：j工作及取馕蛳寒成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外蠢灞鞍牟术包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不’

2、一?毒．包含为获得黼犬学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作晶商慧寿笨研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：么坌二日期：丝年羔月堕日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。：五也年-三月笪日博士学位论文中文摘要摘要目的：为miR-376c可以通

3、过靶向调控TGFA抑制骨肉瘤细胞增殖与转移提供证据“方法：1、临床选敢13例骨肉瘤组织标本及配对正常骨骼肌组织标本：选取人正常成骨细胞为对照，选取三株骨肉瘤细胞作为实验组，QPCR技奎橙测骨肉瘤组织与细胞中miR-376c与TGFAmRNA的表o’。、?。达差异。“2、利展趣-376c模拟物转染骨肉瘤Saos．2细胞，Westernblot检测TGFA和EGFR的表达，接着过表达TGFA，回复miR-376c抑制TGFA和EGFR表达的效应。3、利用双荧燎酶报告基因进一步验证miR-376c对TGFA的靶向调控作用。4、构建miR．376c慢病毒载体，感染Saos．2细胞，用C

4、CK8和Transwell方法检溅miR-376c对Saos．2细胞增殖和侵袭能力的影响，接着过表达TGFA，回复miR-376c对Saos．2细胞的生物学效应。结果：1、组织水平QPCR结果显示，miR-376c在骨肉瘤组织中特异低表达，TGFA在骨肉瘤组织中特异高表达，且两者具有很好的负相关性；细胞水平QPCR结果显示，miR一376c在骨肉瘤细胞中特异低表达，TGFA在骨肉瘤细胞中特异高表达，与组织水平表达趋势一致。2、miR．376c模拟物转染Saos．2细胞，miR-376c过表达，同时TGFA和EGFR表达受到显著抑制；当TGFA过表达后，可回复miR-376c抑制

5、效应。3、成功构建miR-376c慢病毒载体，感染Saos．2细胞，GFP荧光图片显示，感染效率在8C⋯“’上。细胞功能学结果显示miR-376c过表达可显著抑制Saos．2细胞增殖能力和侵袭能力，当TGFA过表达后，可回复miR-376c对Saos．2细胞的功能学效应。结论：墨1、miR-376c与TGFA表达在骨肉瘤组织和细胞水平均成负相关关系。2、miR-376c通过靶向结合TGFA3'-UTR上预测的miR-376c结合II博士学位论文中文摘要位点抑制TGFA蛋白的表达，且可抑制EGFR的表达。3、miR-376c可抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力，TGFA过表达可回复该抑

6、制效应。4、miR-376c可通过靶向调控TGFA抑制骨肉瘤细胞的增殖与侵袭能力。关键词：miR-376c，TGFA，骨肉瘤，靶向调控分类号：Abstractobjeetive：ToprovideevidencesthatmiR-376ccouldimpedeosteosarcomacellproliferationandmigration，atleastpartlybytargetingTGFA．、，Methods：11．Atowof13pairsofprimaryosteosarcomaandtheirmatchedadjacentnorrrmlmyeloidtissues

7、werecollected．Selectedthreekindofosteosar黼．；ICellsa，sexperimentgroupandtheosteoblastsascontrolgroup，thed—iff。e．rentialexpressionofmiR-376candTGFAmRNAwasdetectedwithQPCRtechnology．2．MiR-376cmimicsweretransfectedintoSaos一2cell，detectedtheexpressionof