mir-124靶向调控iaspp抑制结肠癌细胞增殖的研究

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1、中图分类号——UDC博士学位论文学校代码10533M僻124靶向调控认sPP抑制结肠癌细胞增殖的研究Micro鼢认一124RegulatestheProliferationofColorectalCancerCellsbyTargetingiASPP作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：刘奎杰临床医学外科学湘雅二医院齐海智教授论文答辩日期——答辩委员会主席中南大学二0一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的

2、地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：罐吼丝年且!日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通

3、过网络向社会公众提供信息服务。储繇群堕翩签五丝吼丛年二月二日博士学位论文中文摘要目的：寻找一种新的有效、可行、副作用小的结肠癌治疗方法，将在很大程度上改变结肠癌患者的治疗现状，Micro鼬叮A(miRNA)是一类存在于病毒和高等生物中，进化上高度保守的内源性非编码RNA。miRNA广泛参与调控包括个体生长发育、细胞凋亡、增殖及分化在内的许多生命过程，已在多种肿瘤中发现miR-124家族表达异常。本课题拟研究miR．124通过靶向调控iASPP抑制结肠癌细胞增殖的功能学效应，以期为寻找结肠癌的防治靶标提供坚实基础。方法：

4、1、所有组织标本均取自结肠癌手术患者，其中18例来自男性，22例来自女性，患者手术前未行放疗及化疗，年龄35．76岁，平均年龄50．27岁。按uICC和AJCC2012年结肠癌的T№噍分期和临床分期，I期11例，II期9例，III期20例。对照组取同一手术标本的癌旁组织(以距肿瘤5cm组织为癌旁组织)2、选取人结肠上皮细胞为对照，选取三株结肠癌细胞作为实验组，QPCR技术检测iASPP以预测miRNA在结肠癌组织和结肠癌细胞中的表达；3、利用miR．124模拟物以及iASPP．shI矾A转染结肠癌Sw480和HT29细

5、胞，W-estemblot检测iASPP和NF．心的表达，接着过表达iASPP，回复miR．124影响iASPP和NF．KB表达的效应：4、利用双荧光素酶报告基因进一步验证miR-124对iASPP的靶向调控作用；5、构建111iR．124慢病毒载体，感染SW480和HT29细胞，用MTT、Brdu和克隆形成方法检测miR。124对SW480和HT29细胞增殖的影响，接着过表达iASPP，回复miR_124对SW480和Hr29细胞的生物学效博士学位论文中文摘要应。结果：1、可能靶向调节认SPP的miRNAs有miR-

6、124、miR．506、miR-19舶、miR．182；组织水平QPCR结果显示，在各个预测靶向调控iASPP的miI斟As中，miR-124在结肠癌组织中特异低表达；细胞水平QPCR结果显示，miR．124／miR-506在结肠癌细胞中特异低表达，且在SW480和H他9中最为明显；2、miR．124模拟物和jASPP—sbRNA转染SW480和肿29细胞，miR．124过表达或者iASPP被沉默，iASPP表达显著抑制，NF一心表达上调；当转染iASPP0I心克隆后，iASPP过表达可回复miR-124对iASPP和

7、NF．出的调控作用；3、构建miR．124慢病毒载体，感染SW480和Hr29细胞，GFP荧光图片显示，感染效率在80％以上。细胞功能学结果显示mi艮124过表达以及iASPP被沉默可显著抑制细胞增殖能力。结论：1、软件预测靶向调控iASPP的各个mi鼢蛆s中miR-124在结肠癌组织和细胞癌细胞中特异低表达；2、miR．124可靶向调节iASPP的表达，且可上调N暇一心的表达；3、miR．124过表达或者iASPP被沉默可显著抑制结肠癌细胞的增殖能力；4、由上述结果可得，miR-124可通过靶向调控iASPP抑制结肠

8、癌细胞的增殖能力。关键词：曲R—124，iASPP，结肠癌，增殖分类号：6lom博士学位论文英文摘要AbstractobjectiVe：ThegoaIoftIlestudyistotestwhemermiR—l24inmbitsproliferationofcoloncancercellsbyta哩etiIlgiASPP．Meth