中华眼镜蛇蛇毒对急性肺损伤及肺纤维化的保护作用及其机制

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1、硕士学位论文论文题目中华眼镜蛇蛇毒对急性肺损伤及肺纤维化的保护作用及其机制研究生姓名崔奎指导教师姓名秦正红(教授)专业名称药理学研究方向肺纤维化药物治疗及机制研究论文提交日期2013年4月中文摘要中华眼镜蛇蛇毒对急性肺损伤及肺纤维化的保护作用及其机制苏州大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明:所提交的学位论文是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不喊为获得苏州大学或其他教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和机体,均已在文中以明确方

2、式标明。本人承担本声明的法律责任。研究生签名:____________日期:___________学位论文使用授权声明苏州大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、清华大学论文合作部、中国社科院文献信息情报中心有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外,允许论文被查阅和借阅,可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权苏州大学学位办办理。研究生签名:___________日期:__________导师签名:___________日期:______

3、____中华眼镜蛇蛇毒对急性肺损伤及肺纤维化的保护作用及其机制中文摘要中华眼镜蛇蛇毒对急性肺损伤及肺纤维化的保护作用及其机制中文摘要第一部分NNAV对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用目的:研究中华眼镜蛇蛇毒(Najanajaatravenom,NNAV)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)所致的小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法:将KM小鼠,雌雄各半,体重18~22g,随机分为(n=10)生理盐水对照组、中华眼镜蛇蛇毒小剂量组(30µg/kg)、中剂量组(90µg/kg)、大剂量组(270µg/kg)。实验组以灌胃给药的方式预给药四天,分别给予不同剂量

4、蛇毒溶液0.2ml/10g体重,第五天腹腔注射LPS(5mg/kg,0.1ml/10g)诱导急性肺损伤模型,对照组小鼠给予同体积生理盐水,6小时后取材称量肺重,计算肺系数,检测血清中TNF-α和IL-1β的含量,Westernblot检测肺组织内IκB-α的表达,免疫组化实验检测NF-κB的核转位情况,HE染色观察肺损伤程度。结果:急性肺损伤模型小鼠肺系数和血清中的IL-1β和TNF-α的含量较正常对照组显著增加(P<0.05或P<0.01),NNAV给药组肺系数和血清中IL-1β和TNF-α的含量较模型组显著减少(P<0.05或P<0.01)。LPS模型组小鼠肺组织水肿明显,主

5、要病变为弥漫性肺水肿、炎症、出血,间质增宽伴有大量炎细胞浸润,肺泡结构紊乱。NNAV各剂量组小鼠肺泡间隔增宽较模型组明显减轻,肺泡炎明显减轻,肺泡结构有明显改善。NF-κB在肺组织内核转位明显升高,IκB-α含量则明显下调,而给予NNAV的组别可以显著抑制NF-κB核转位并抑制IκB-α的下降。结论:中华眼镜蛇蛇毒能够对抗脂多糖LPS诱导的急性肺损伤,其作用机制可能是通过I中文摘要中华眼镜蛇蛇毒对急性肺损伤及肺纤维化的保护作用及其机制抑制NF-κB的活化,减少细胞因子、炎症介质(TNF-a、IL-1β)的合成与释放而起到抗炎作用的。关键词:中华眼镜蛇蛇毒;急性肺损伤;脂多糖;NF

6、-κB第二部分NNAV对博莱霉素和LPS诱导的肺纤维化的保护作用目的:研究NNAV对博来霉素(Bleomycin,BLM)诱导的肺纤维化模型和反复给予脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺纤维化小鼠的保护作用。方法:将雄性KM小鼠90只随机分为两批,每批随机分为(n=9)生理盐水对照组、中华眼镜蛇蛇毒小剂量组(30µg/kg)、中剂量组(90µg/kg)、大剂量组(270µg/kg)。实验组以灌胃给药的方式预给药四天,分别给予不同剂量蛇毒溶液0.2ml/10g体重。第五天建立肺纤维化模型,模型1:第五天向小鼠气管内缓慢注射博莱霉素5mg/kg诱导肺纤维化模

7、型,正常对照组注入等体积的生理盐水。模型2:第五天除对照组小鼠外,均腹腔注射LPS(5mg/kg,0.1ml/10g),对照组小鼠给予同体积生理盐水,之后每周一次腹腔注射LPS反复诱导肺纤维化模型。治疗组NNAV每天灌胃给药一次,剂量同上,对照组和模型组给予等体积生理盐水,记录体重变化,8周后,取材称取肺重,检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,HE染色观察肺损伤程度。结果:BLM模型组和LPS模型组小鼠体重增加较正常组明显减少,肺系数和HYP含量明显增加(P<0.05或P<0.01

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