mgm-csf基因修饰性肺癌细胞瘤苗构建及其在动物体内作用初步的研究

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1、天津匿辨大学硕士掌位论文APCCTL’DCDEPCdNTPELISAEGFPFITCGM．CSFHLAIFN叫IgGIL-2LDHMHCmRNANK0D英文缩略语AbbreviationAntigenpresentingcellcytotoxicityTlymphocyteDendriticcelldiethylpyrocarbonatedeoxyribonucleosidetriphosphateenzyme-linkedimmunosorbentassayenhancedgreenfluorescentproteinfluoresceinisothioc

2、ynateGranuloeyte-macrophagecolony-stimulatingfactorhumanleucocyteantigeninterferonimmunoglobulinGinterleukinlactatedehydrogenasemajorhistocompabilitycomplexmessengerdbonucleicacidNattire16llercellopticaldensity抗原递呈细胞细胞毒性T淋巴细胞树突状细胞焦碳酸二乙酯脱氧核糖核苷三磷酸酶联免疫吸附试验增强型绿色荧光蛋白荧光素粒细胞巨噬细胞集落刺激因子人类白细

3、胞抗原y干扰素免疫球蛋白G白细胞介素2乳酸脱氢酶主要组织相容复合物信使RNA自然杀伤细胞光密度天蔫}医科大尊嘎士掌位论文PIRNa∞Rr．PCRT从TNFTSApropidineiodideribonueleasercvel'sctranscriptionpolymerase—chainreactiontumorassociatedantigentumornecrosisfactortIlmourspecificantigen碘化丙啶核糖核酸酶逆转录一聚合酶链式反应肿瘤相关抗原肿瘤坏死因子肿瘤特异抗原学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师

4、指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：壶翌堡垒日期：知旬年j月如日

5、学位论文版权使用授权书本人完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文

6、属于．不保密匹蚕。(请在以上方框内打“√”)作者躲塑造导师虢趁丝隰聊年呐。日，博医荆·大尊口孤士掌位试?文摘要第一部分mGM-CSF基因修饰性肺癌瘤苗的构建及鉴定目的：以mGM-CSF基因修饰小鼠肺腺癌细胞系LA795构建肿瘤疫苗，并鉴定mGM-CSF的表达水平。方法：利用常规分子生物学方法设计并构建含有一个mGM—CSF基因和一个EGFP基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-mGM质粒，经EcoRI及BamHI双酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染LA795肺腺癌细胞，用荧光显微镜检测细胞中EGFP的表达，用ELISA法检测细胞中mGM-CSF的表达，最后

7、照射灭活制备肺癌瘤苗．结果：构建了真核表达载体plRES2-EGFP—mGM，用脂质体法转染LA795肺癌细胞后，经荧光显微镜和ELISA法检测，可见细胞内有EGFP及mGM·CSF的表达，mGM-CSF表达量适合制备肿瘤瘤苗。结论：成功构建真核表达载体plRES2一EGFP—mGM，并在LA795肺癌细胞中表达，转染后的小鼠肺癌细胞能够表达足够功能正常的mGM-CSF蛋白，经照射灭活成功制备mGM-CSF分泌型LA795肺腺癌细胞瘤苗．第二部分mGM-CSF基因修饰性肺癌瘤苗在动物体内作用的初步研究目的：初步探讨mGM-CSF分泌型LA795肺癌瘤苗在动物

8、体内所诱导的非特异性细胞免疫反应及其机制．方法：将构建完成的mGM—CSF分泌型LA795肺癌瘤苗免疫T739小鼠，同时设立无mGM-CSF基因修饰LA795肺癌瘤苗组及PBS对照组，应用流式细胞法检测检测小鼠血清IFN-v的分泌水平，外周血免疫细胞分布、脾细胞杀伤实验等．结果：mGM--CSF分泌型LA795肺癌瘤苗组免疫小鼠血清中IFN-Y的含量，外周血中CD8+T的含量高于无mGM-CSF基因修饰LA795肺癌瘤苗组及PBS对照组(P均<0．01)，其脾细胞的非特异性杀伤能力显著增加，亦远高于其与两组(P

9、5肺腺癌细胞瘤苗可诱导自体T细胞向CTL方向增殖分化