microrna-21在急性脊髓损伤中的作用及川芎嗪的抗凋亡作用机制研究

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1、中图分类号R6UDC610博士学位论文学校代码!Q533密级公珏MicroRNA．21在急性脊髓损伤中的作用及川芎嗪的抗凋亡作用机制研究TheEffectofmicroRNA·-21inSpinalCordInjuryandtheMechanisminvolvedintheAnti··ApoptosisEffectsofTetramethylpyrazineinSpinalCordInjury作者姓名：黄江湖学科专业：临床医学研究方向：外科学(脊柱外科)学院(系、所)：湘雅医院指导教师：胡建中教授吕红斌教授论文

2、答辩日期坦13：￡少答辩委员会主席敏中南大学二O一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名日期：塑旦年勇单日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学

3、位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：垄丛年』月兰珀簋±堂僮途塞虫窒摘要MicroRNA-21在急性脊髓损伤中的作用及川芎嗪的抗凋亡作用机制研究摘要研究背景急性脊髓损伤(Spinalcordinjury，scI)是临床中常见的一类运动系统创伤，可致不同程度的肢体四瘫或截瘫以及劳动能力的丧失，给社会和家庭带来沉重负担。研究表

4、明，细胞凋亡是急性SCI后脊髓继发性损伤加剧的重要原因，减少细胞凋亡对于促进脊髓创伤后修复具有重要意义。MicroRNA(mi：RNA)是生物体内一类较短(约19"-'22个核苷酸)的非编码单链小分子RNA，通过与其靶mRNA的3'UTR区以完全互补或部分互补配对的方式相结合，诱导其降解或抑制其翻译的作用，从而发挥其调控基因表达的功能。近年来，有文献报道miR-21与中枢神经系统损伤有关。其中miR-21在许多细胞和动物模型中被证实具有强大的抗凋亡作用，但其在急性SCI中的作用尚未有文献报道。川芎嗪(Tetra

5、methylpyrazine，TMP)是一种从中药川芎中提取的生物活性单体。近年来，本课题组研究表明TMP对急性SCI具有抗凋亡作用。但其抗凋亡机制尚有待进一步研究。为此，本研究以大鼠急性SCI模型为基础，探讨miR-21在急性SCI中是否具有抗凋亡作用及TMP在急性SCI的抗凋亡作用是否与调控miR-21及其凋亡相关靶基因的表达有关。为治疗急性SCI提供新的治疗靶点。蝗±堂焦论文主塞摘要第一章MicroRNA在大鼠急性脊髓损伤中的表达谱及其生物学分析目的探讨miRNA在大鼠SCI后的表达谱变化，分析其可能参与

6、SCI继发性损伤的机制。方法(1)实验动物分组：成年雄性SD大鼠(180．2209)12只，随机分成4组(n_3)：SCI．1d组；SCI．3d组；Sham．1d组；Sham．3d组。SCI．1d和SCI．3d组大鼠采用自制Allen’s打击法制作急性脊髓损伤模型；Sham．1d和sham．3d组仅行椎板切除术。(2)总RNA的提取：采用Trizol法提取脊髓组织总RNA。(3)微阵列芯片实验：利用miRCURYTMLNAArray“16．O)芯片检测4组中miRNA的表达谱。(4)芯片验证：运用qRT-PCR

7、验证4个差异表达的miRNAs(miR-21、miR-126、miR-24和let．7b)。(5)生物信息学分析：运用Mirbase、Miranda和Mirdb三个靶基因预测软件分析异常表达的miRNAs所调控的靶基因及运用KEGG数据库分析靶基因所涉及的信号通路。勿士甲三日木(1)microRNA芯片结果：共有22个miRNAs出现异常表达。其中1d组14个：9个miRNAs表达上调，5个miRNAs表达下调；3d组8个：3个miRNAs表达上调，5个miRNAs表达下调。(2)芯片验证：qRT-PCR结果示

8、：miR-21在SCI后1天表达无显著变化，3天表达上调(P