濒危药用植物杜仲产活性成分内生真菌的研究

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1、摘要选用珍稀药用植物杜仲，采用常规的真菌分离方法，从中分离出了44株内生真菌，并以此为对象进行了以下研究工作。根据黄酮类和环烯醚萜类化合物所具有的颜色反应，初步筛选出可能生产黄酮类化合物的菌株3株——．Dz2、DzY5、Dzll。进一步通过紫外．可见光光谱扫描，并检测其产物稳定性，最终确定菌株Dzll可能产黄酮类化合物——槲皮素，并且产量相对稳定，故作为下一步的实验菌株。绘制Dzll菌株的生长曲线和槲皮素产量的变化曲线，通过紫外分光光度法和TLC法测定槲皮素的最高产量，分别为O．418mg／L和0．340mg／L。利用H

2、PLC法分析发现DZll菌株所产槲皮素在发酵液和菌丝体内都存在，但菌丝体内含量相对较少。通过常规湿法装柱，对Dzll菌株发酵液进行柱层析分离，得到6种不同Rf值的成分，其中第5部分有着与槲皮素标准品相同的紫外．可见光光谱。经再次纯化，通过质谱检测其【M+H】+的m／z为303．38，与槲皮素的分子量302．23正好相符。再对照样品和槲皮素标准品的红外吸收图谱，发现它们的红外光谱图几乎相同，也就是说明它们含有相同的结构基团或化学键。由此确定DZll菌株所产的活性物质中含有槲皮素。通过对不同固体培养基中菌落的生长速率和长势分

3、析，发现在豆芽汁培养基上不但菌丝生长较快而且菌丝较为浓密。通过对不同液体培养基中Dzll的生物量和槲皮素产生量的对比，筛选出适合DZll菌丝生长及产物槲皮素合成的豆芽汁液体培养基。在基本液体培养基的基础上，通过单因素分析实验，确定实验室发酵Dzll菌株的最佳碳源、氮源、PH值和温度分别是蔗糖、脲、7．O和28℃。通过正交试验，得出适合菌丝生长的培养基为：把豆芽汁液体培养基中的蔗糖量改为259．L-1，添加脲29。L．1，装量为120ml／300ml；适合槲皮素积累的培养基的为：把豆芽汁液体培养基的蔗糖量改为309．L-1

4、，添加脲2．59．L-1，装量为100ml／300ml。根据DZll菌株的显微结构特征，对Dzll菌株进行了分类，初步确定为：真菌门，半知菌类，腔孢纲，球壳孢目，球壳孢科中的刺茎点菌属。关键词：杜仲；内生真菌：黄酮类化合物；槲皮素；发酵条件StudiesonendophyticfungiwithactiVeproductionabilityfmmaVulne翰blemedicinalplant肋∞mm施研锄D谢妇OHvAbstractF0rty-f札rendoph”icflln百strainswereisolated丘．

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