mtor信号通路在脑缺血中的作用及机制

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1、郑州大学硕士学位论文mTOR信号通路在脑缺血中的作用及机制姓名：曹志斌申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：张艳201204摘要目的：研究表明脑缺血时神经元及胶质神经细胞多种信号转导途径被激活，如MAPK信号转导通路，P13K／Akt信号转导通路，JAK／SATA信号转导通路，NF．KB转录因子参与的信号通路，蛋白激酶C(proteinkinaseC，PKC)信号转导通路等。近来研究发现mTOR信号转导通路与多种神经疾病有关，如癫痫，中风，但是具体机制仍不明确。mTOR信号转导通路在细胞生长与存活中发挥着至关重要的作用。一些证据支持m

2、TOR具有神经损伤作用，而另外一些证据则表明mTOR具有神经保护作用。P13K-Al(t_nlTOR信号转导通路为mTOR上游最常见信号通路，研究指出ASICla阻断剂能够提高提高P13K／Akt信号通路活化程度，也有研究表明，P—AKT活化水平也可以调节ASICla的表达，提示mTOR与ASICs可能有一定相关性。本研究通过体外培养离体大鼠大脑皮质皮层神经元，建立缺氧缺血／再灌注(O㈣)损伤模型和酸损伤模型，模拟脑缺血损伤，通过MTT法，Hoechst33258荧光染色法，Westernblot等方法探讨mTOR在脑缺血损伤中的作用及

3、机制以及mTOR与ASICs是否具有一定相关性。方法：l新生24小时内大鼠大脑皮质皮层神经元原代培养，阿糖胞苷抑制非神经元的生长；2建立离体皮层神经元OGD／R损伤模型和酸损伤模型；3设立阿米洛利(109mol／1)阳性对照组、正常对照组、(+)儿茶素0．25、0．5、lmmol／L药物处理组，OGD／R模型损伤组，采用Hoechst33258染色神经元凋亡；4mTOR在脑缺血中的作用及ASICs阻断剂对其的影响4．1设立正常对照组，O．02、0．2、l、5、10、25、50、100nmol／L雷帕霉素药物处理组，OGD／R模型损伤组与

4、酸损伤模型组，形态学观察比较，MTT比色法检测各组细胞存活率；4．2设立正常对照组、OGD瓜模型损伤组与酸损伤模型组，100nmol／L雷帕霉素对照组，10，1001maol／阿米洛利药物处理组，lmmol／L儿茶素药物处理组。Westernblot测mTOR下游，p-p70S6K，p-4e．bpl蛋白的表达。结果：摘要1OGD／R再灌注24h，神经元Hoechst33258染色。各组细胞凋亡率如下：正常组(6．58+1．78)，模型组(33．88+1．73)，amiloridum组(17．8a：2．87)，(+)．eatechinIm

5、mol／L组(18．55士1．73)，(+)．catechin0．5mmol／L组(19．42士0．092)，(+)一eatechin0．25mmol／L组(28．65+1．47)。与正常组相比，模型组与药物处理组皮层神经元凋亡数明显增加俨

6、组的细胞存活率如下：正常组(100．00-士-0．00)，模型组(65．67+3．25)，100nmol／LPAPA处理组(71．97士4．47)。50nmol／L处理组(70．05士3．64)，25nmol／LPAPA处理组(73．59+1．52)，lOnmol／LPAPA处理组(79．87士2．74)，5nmol／LPAPA组(80．36d：3．10)，lnmol／LPAPA处理组(81．02_土2．86)，0．2nmol／LPAPA处理组(79．71a：4．64)，0．02nmol／LPAPA组(78．18士9．34)。与正常组相

7、比，RAPA药物组和模型组皮层神经元存活率明显下降(P<0．01)；与模型组相比，RAPA各组神经元存活率均显著提高(尸<0．05)；RAPA各组神经元存活率有显著的差异，小于10nmol／LRAPA药物处理组，明显高于RAPA大剂量组(尸

8、组(78．77士4．12)，lOnmol／LPAPA处理组(77．07a：1．51)，5nmol／LPAPA组(67．64士4．56)，1nmol／LPAPA处理组(72．24a：1．57)，0．2nmol