去泛素化酶usp14在谷氨酰胺酶c降解中的作用及其分子机制研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：406531813306南昌大学硕士研究生学位论文去泛素化酶USP14在谷氨酰胺酶C降解中的作用及其分子机制研究StudiesontheroleandmolecularmechanismofdeubiquitinaseUSP14inthedegradationofglutaminaseC张成夫培养单位（院、系）：南昌大学转化医学研究院指导教师姓名、职称：王建斌教授申请学位的学科门类：理学硕士学科专业名称：生物学论文答辩日期：2016年6月答辩委员会主席：评阅人：2016年6月万方数据Studiesontheroleandmole

2、cularmechanismofdeubiquitinaseUSP14inthedegradationofglutaminaseCADissertationPresentedByChengfuZhangMajor:BiochemistryandmolecularbiologySupervisor:ProfessorJianbinWangSubmittedtotheGraduateSchoolofNanchangUniversityfortheDegreeofMASTEROFSCIENCEJune,2016SchoolofMedicine,NanchangU

3、niversity,Nanchang,330031,P.R.China万方数据学位论文独创性声明一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校

4、有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_m

5、ail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I万方数据摘要摘要GAC(glutaminaseC)是一种肾型的谷氨酰胺酶。它能催化谷氨酰胺分解成谷氨酸和氨，参与三羧酸循环，在能量代谢中发挥重要作用。目前，有研究报道GAC可促进乳腺癌、肺癌等肿瘤的发生发展，但其上游信号通路调控的机制并不清楚。我们前期研究中通过酵母双杂交实验发现GAC与去泛素化酶USP14(ubiquitinspecificpeptidase14)蛋白之间可能存在相互结合。因此，我们将在本论文中对USP14与GAC之间的作用方式及其调控通路进行考察。我们采用免疫共沉淀

6、技术进一步验证了USP14与GAC的蛋白相互结合。siRNA干扰USP14后促进GAC的蛋白表达而不影响其mRNA水平。基于USP14的去泛素化功能，我们检测了USP14缺失或者过表达情况下GAC的泛素化水平，结果发现USP14显著地影响了GAC的泛素化修饰。其中，过表达USP14后GAC通过K48位修饰的泛素化水平增加，而酶活性突变的USP14没有相应的作用。因此，本研究表明USP14通过泛素-蛋白酶体途径参与了GAC的蛋白降解，且其降解可能是通过K48位修饰的方式进行的。此外，我们检测了USP14的缺失对非小细胞肺癌细胞表型的影响。结果发现，干扰USP

7、14的表达后，非小细胞肺癌细胞的增殖、克隆集落形成、细胞周期及细胞自噬都受到抑制。这充分证明了USP14在非小细胞肺癌的生长中起着重要作用。关键词：USP14；谷氨酰胺酶C；26S蛋白酶体；泛素II万方数据AbstractABSTRACTGAC(glutaminaseC)isakidney-typeglutaminase,whichcatalyzesthehydrolysisofglutaminetoglutamateandammonia.Itparticipatesincitricacidcycleandplayimportantroleinenergy

8、metabolism.Somerecentfindingsrepo