利用人类乳牙牙髓干细胞进行牙齿再生的初步研究

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1、学校代码：．!照墼学号：垄螋至丝!福建师范大学硕士学位论文利用人类乳牙牙髓干细胞进行牙齿再生的初步研究TheElementaryStudyofToothRegenerationfromStemCellsfromHumanExfoliatedDeciduousTeeth焦鹏学科专业：筮直生物堂研究方向：厶佳王细胞当墨宣受生指导教师：鲎鏖定数攫申请学位级别：堡一堂亟±论文提交日期：论文评阅人：论文答辩日期：答辩委员会主席：学位授予单位：学位授予日期：二零零五年四月擅建娅菹太堂2Q壁量生蜃旦内容提要本研究尝试建立人类乳牙牙髓干

2、细胞(stemcellsfromhumanexfoliateddeciduousteeth，SHED)体外快速扩增方法并对利用SHED进行牙齿再生进行了初步的探索。主要研究工作包括：SHED的分离培养及初步鉴定，SHED体外快速扩增方法的建立，Alu和Pfl地高辛标汜探针的制备，EIO．5鼠胚(小白鼠胚胎发育第lO．5天)第一腮弓上皮和第二腮弓上皮分别与SHED的重组，SHED以50％比例掺入到E13．5鼠胚牙间充质细胞后与E13．5鼠胚牙上皮的重组，以及DNA原位杂交检测鼠源组织和人源组织。实验结果表明，通过分离培养S

3、HED，确定用低密度(1．5cells／cm2)接种更有利于SHED的体外快速扩增，通过低密度接种连续传代三次也就是大约六周的时间罩，SHED大约扩增了1010—10¨倍。通过克隆形成效率实验与矿化结节实验，确定这些扩增后的细胞仍然具有与第一次进行低密度扩增时的SHED即起始时的SHED基本相同的克隆形成能力而且在体外仍能形成矿化结节，因此保留了多分化潜能。利用小白鼠为模型建立了一套牙齿异体再生技术并正在不断完善，通过嵌合体组织重组实验，不但证明了不同种间的组织可以相互作用，正常的发育成牙齿结构，而且初步证实在牙齿的再生

4、过程中SHED发育形成牙组织的潜能是以被诱导者的形式存在，即SHED只具有应答能力，而不具有诱导牙齿发育的潜能。作为被诱导者，对具有诱导能力的上皮组织或问充质组织作出应答反应，共同发育形成牙齿的结构。关键词：乳牙牙髓干细胞，牙齿再生，重组，移植AbstractThisstudyattemptedtoestablishthemethodofrapidexpansionofstemcellsfromhumanexfoliateddeciduousteeth(SHED)anddidtheelememaryexploration

5、aboutregenerationoftoothfromSHED．nlestudiesincludedisolating，culturingandidentifyingofSHED；establishingthemethodofrapidexpansionofSHED；AluandPfldigoxigenin—pmbepreparative；recombinatingbetweenthefirstbranchialarchepitheliumsofmouseembryos(El0．51andSHED；recombinat

6、ingbetweenthesecondbranchialarchepitheliumsofmouseembryos(ElO．51andSHED；recombinatingbetweentoothepitheliumsofmouseembryos(El3．5)andtoothmesenchymecellsofmouseembryosfEl3．5)mixedinto50％SHED；checkingmousetissueandhumantissuewithDNAinsituhybridization．Byisolatingan

7、dculturingSHED，theresultdemonstratedthatthecellsgrewmostrapidlywhentheywereinitiallyplatedatlowdensities(1．5cells／cm2)．Inthreepassagesinwhichthecellswereplatedatlowdensity，theywereamplifiedabout1010—1011．foldin6weeks．Thecellsretainedtheirabilitytoformcalcifieddep

8、ositionandtheaveragepercentcfusattheendofthethirdpassage(sixweeks)wasaboutthesameastheinitialvalueforthesamples(55％VS．58％)andthereforeapparentlyretainedtheirmu