鸡traf3、traf6基因的克隆、表达及其在鸡抗病毒免疫应答过程中的作用研究

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationMolecularcloning，tissuedistributionofchickenTRAF-3andTRAF-6genes，andtheirrolesinchicken’SativiralimmuneresponseByLuoLeiSupervisor：Prof．Yi—pingLiuAnimalGenetics，BreedingandReproductionMolecularGe

2、neticsandPoultryBreedingTheCollegeofAnimalScienceandTechnology,SichuanAgriculturalUniversityYa’an，SichuanProvince，P．R．ChinaJune，2014万方数据论文指导小组成员朱庆(教授)王彦(副研究员)赵小玲(副教授)(四川农业大学动物科技学院)lIlllllllUllIllllrlllllllll[IIlllIIlJO120859本论文由四川省“十二五"育种攻关项目(2011NZ00

3、99．7)资助在四川农业大学“畜禽遗传资源发掘与创新利用’’四川省重点实验室完成兀从万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生躲骚磊M忙6Pi{B关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业

4、大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。＼厶论文不保密。权。(请在以上口内划“√”)研究生虢雾毳导师签名：刨盏午口本论文保密，在一年解密后适用本授≯)q年6只){日．耐仁弓只})日万方数据摘要先天免疫作为机体的第一道防线，在抵抗病原入侵和诱导后天免疫的过程中发挥着重要的作用。TRAF．3和

5、TRAF．6作为TRAF家族的两个重要成员，其在哺乳动物的先天抗病毒免疫过程中发挥着重要的作用，但是其是否也参与了鸡的先天抗病毒免疫通路呢?本试验首先通过设计特异的引物对鸡的TRAF3、TRAF6基因的CDS区进行克隆；然后通过定量PCR技术，分析了TRAF-3和TRAF-6基因在鸡心、肝、脾等共11个组织中表达分布；接着我们分别转染双链的DNA．Poly(dA：dT)和双链的RNA．Poly(I：C)进入鸡的胚胎成纤维细胞，通过Real．timePCR检测TRAF3、TRAF6基因及其下游基因在

6、鸡胚成纤维细胞抵抗外源的DNA和RNA免疫过程中的表达量的变化：同时我们采用细胞攻毒试验，分析了TRAF3、TRAF6基因及其下游基因在鸡胚成纤维细胞感染新城疫病毒后的表达变化，进一步确定其在鸡抗病毒免疫过程中的作用。最后我们选用将80只10日龄SPF白来航雏鸡，分别通过腹腔注射注射接种0．1ml中等毒力和标准强毒病毒稀释液病毒。在感染新城疫病毒后24h、48h、96h进行采样。其中攻毒组每次采样5只鸡，对照组每次采样4只鸡。每只鸡分别采集脾脏、胸腺和法氏囊组织，利用荧光定量的方法进一步确定TRA

7、F3、TRAF6基因及其下游基因在鸡体内抗病毒免疫过程中的作用。主要研究结果如下：1)通过对鸡TRAF3、TRAF6基因进行克隆，序列比对之后得到了TRAF3的2个预测序列和1个新的序列，TRAF6得到1个预测序列和1个新的序列。我们发现鸡的TRAF3、TRAF6的蛋白结构与人类的蛋白结构相似，猜测鸡的TRAF3、TRAF6基因与人类TRAF3、TRAF6基因有相似的功能。2)对TRAF3、TRAF6基因在不同组织中的表达进行分析，发现其在脾脏、肺和胸腺中的表达量最为丰富，极显著(p<0．01)高

8、于其它组织。说明TRAF3和TRAF6基因可能主要参与在鸡脾脏、肺、胸腺中的先天免疫。3)通过转染Poly(dA：dT)和Poly(I：C)进入鸡胚成纤维细胞，我们发现TRAF3、TRAF6及其下游基因表达量在感染2种模式病毒后，随着浓度或者感染时间的增加，TRAF3、TRAF6及其下游基因的表达都会有所上调，而且达到一定浓度或万方数据者时间时，其表达会显著上调。说明TRAF3、TRAF6基因可能参与结合识别DNA模式病毒和双链RNA模式病毒的过程，能够诱导下游基因产生干扰素和白细