高纯度纳米雄黄的制备及其对hepg2细胞凋亡诱导作用的研究

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1、万方数据中图分类号UDCR363610硕士学位论文学校代码!Q53三密级公珏高纯度纳米雄黄的制备及其对HepG2细胞凋亡诱导作用的研究Preparethepurifiedrealgarnanoparrticlesandstudythe印optosis—inducingef．fectonHepG2cells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：王栋临床医学普通外科学湘雅医院周乐杜副教授论文答辩日期竺生L牟答辩委员会主席中南大学2014年5月万方数据学位论文原创性声明恻I掣掣幽型螋本人郑重声明，所呈交的学

2、位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：薹堑：日期：型年上月翠日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；

3、本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：率日期：竺!土年』月4日导师签名日期：立止年』月4日万方数据高纯度纳米雄黄的制备及其诱导HepG2细胞凋亡作用研究摘要目的：探讨高纯度纳米雄黄的制备方法，以制备高纯度，高生物利用度，低毒副作用的纯化纳米雄黄颗粒，并初步研究其对HepG2细胞诱导凋亡作用。方法：(1)高纯度纳米雄黄制备方法：1)天然雄黄经去离子水和不同浓度的HCl、Na0H纯化

4、处理后得到纯化雄黄；2)天然雄黄、纯化雄黄经高能球磨法制备得到天然纳米雄黄、纯化纳米雄黄；3)天然纳米雄黄、纯化纳米雄黄经2．OMHCl纯化得天然纳米雄黄(纯化组)、纯化纳米雄黄(纯化组)，所有组别雄黄颗粒均测定颗粒形貌、粒径和As2S2含量。(2)高纯度纳米雄黄颗粒对HepG2细胞凋亡作用研究：1)MTT法检测不同浓度雄黄颗粒作用于HepG2细胞增殖率，筛选最佳作用浓度及作用时间；2)HepG2细胞经20．O¨g／mL的不同雄黄颗粒作用24小时后观察细胞形态学变化、流式细胞仪测定凋亡率、Real一timePCR法测定

5、Bc卜2和BaxmRNA表达水平。结果：(1)天然雄黄经去离子水和不同浓度的HCl与NaOH纯化处理后As2S2含量均有所提高，各处理组之间差异有统计学意义(P<0．05)。(2)高能球磨法可成功制得纳米级雄黄颗粒，天然纳米雄黄、纯化纳米雄黄、天然纳米雄黄(纯化组)、纯化纳米雄黄(纯化组)粒度分别为(135．13±4．69)珈[11、(134．39±2．33)ru：11、(135．28±1．37)珈n、(134．73±2．22)m；As2S2含量分别为(92．15±0．37)％、(97．05±O．21)％、万方数据(9

6、7．42±O．05)％、(98．33±O．04)％。纯化处理可提高雄黄颗粒纯度(PO．05)。(3)MTT法结果显示HepG2细胞经不同组别雄黄颗粒处理后增殖率均有不程度降低，且具有时间效应和浓度效应，通过MTT筛选出最佳作用浓度及作用时间为20．0pg／mL和24h。(4)细胞形态学检测及流式细胞仪证实不同雄黄颗粒均可诱导HepG2细胞发生凋亡，其中以纯化纳米雄黄(纯化组)作用最为显著，其机制可能与下调Bc卜2表达，上调Bax表达相关。结论：(1)球磨前后对进行纯化处理，可制备高

7、纯度纳米雄黄颗粒；(2)不同类别雄黄颗粒对HepG2细胞均有凋亡诱导作用，其中高纯度纳米雄黄颗粒作用最强；(3)高纯度纳米雄黄颗粒诱导HepG2凋亡可能通过下调Bcl．2表达，上调Bax表达实现。(4)去离子水、HCl和NaOH均能对雄黄颗粒进行纯化，HCl纯化效果最为明显。关键词：纳米雄黄，纯化，高能球磨法，凋亡，流式细胞术分类号：R363III万方数据Preparethepurifiedrealgarnanopaniclesandstudytheapoptosis—AbstractinducingeffectonH

8、epG2cellsAim0bjecttopreparehigherpurity，higherbioaVailability，lowertoxicsideef．fectsofpurifiedrealgarnanoparticles，and6Jrtherstudytheapoptosis-inducingeff色ctonHepG2ce