肺炎链球菌磷壁酸胆碱成分介导细菌的侵袭

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1、!!卷"期微生物学报&’()!!.’)"#$$!年%月!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$*+,-#$$!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!肺炎链球菌磷壁酸胆碱成分介导细菌的侵袭尹一兵周东耀张雪梅孟江萍康格非（重庆医科大学医学检验系重庆!$$$/%）摘要：分析肺炎链球菌细胞壁胆碱成分在其侵袭宿主细胞的过程中的作用。通过肺炎链球菌对人脐静脉内皮细胞的侵袭实验，观察血小板活化因子受体（@AB6C）拮抗剂D.1#$#/对肺炎链球菌侵袭率的变化，以及乙醇胺取

2、代细胞壁胆碱后肺炎链球菌侵袭率的变化。研究发现受体拮抗剂D.1#$#/处理活化血管内皮细胞后，肺炎链球菌的侵袭率显著降低（!E$F$/），乙醇胺取代肺炎链球菌细胞壁成份中的胆碱同样降低了细菌对活化内皮细胞的侵袭（!E$F$/）。实验表明肺炎链球菌可能是通过脂磷壁酸和磷壁酸的胆碱成分与内皮细胞表面的血小板活化因子受体结合来介导侵袭作用的。关键词：肺炎链球菌，侵袭，血小板活化因子受体（@AB6C）中图分类号：G2"文献标识码：A文章编号：$$$/6%#$2（#$$!）$"6$"%26$!肺炎链球菌（"#$%&#’(’(()*&+%),’+-.%）可粘附于

3、背景，本研究着重探讨细胞因子激活血管内皮细胞［/］人的鼻咽部，一般不出现临床症状。如果机体自后：（/）肺炎链球菌对活化的内皮细胞的侵袭及其与身状态发生改变或伴有其他疾病，肺炎链球菌就会@AB受体的关系。（#）血小板活化因子受体拮抗剂成为条件致病菌，从粘附部位下行到肺，与肺泡上皮及蛋白质合成抑制剂对肺炎链球菌侵袭的影响。细胞及毛细血管内皮细胞发生作用，引起大叶性肺!材料和方法炎。细菌甚至可入血，引发败血症及肺炎链球菌性［#］脑膜炎等并发症，死亡率大大增加。有文献报!"!材料［"，!］道：鼻粘膜上皮细胞表面含有H(?.A?!(""H9(糖@AB受体拮抗剂

4、D.1#$#/及溶剂，由法国OQD基，它是肺炎链球菌粘附的受体，而静息期（C-IJ:,=）研究所DM9R+-J)@博士惠赠；白介素6/（OS6/）/$$万血管内皮细胞表面含H9(.A?!(""（!("!）H9(结构，TU支，购自北京邦定生物工程公司；肿瘤坏死因子也可被肺炎链球菌特异识别。但是，在炎症时，血管（4.B6"）($万TU支，购自北京邦定生物工程公司；肺内皮细胞表面结构发生巨大变化，出现一些新的受炎链球菌标准V#型菌株，中国医学科学院菌种保体。其中，就包括血小板活化因子受体（@(9J-(-J9?J:6存中心；人脐静脉内皮细胞由本实验室分离培养

5、。K9J:,=L9?J’MM-?-NJ’M，@AB6C），它能与@AB结合，介导!"#人脐静脉内皮细胞的分离培养［1］［2］@AB的炎症反应。肺炎链球菌的磷壁酸和脂磷壁参照安静等方法，略加改进。无菌取新鲜酸与@AB具有相同的磷酸胆碱基团，它们也能与脐带#$?8W#1?8，去掉破损或有夹痕部分。无菌X6［%］@AB6C结合。但是，这些壁成分与@AB6C结合后Q9,YI’液后复冲洗，去除脐静脉中的淤血。静脉两能否介导细菌粘附侵袭，目前还不清楚。此外，@AB6端插上去尖端的大号针头，然后用止血钳夹紧。从C的一个重要特征就是它与@AB结合后，很快发生一端将$

6、F#1Z的胰酶灌入，当另一端有胰酶流出时［0］“内化”（O,J-M,9(:P9J:’,）作用而进入细胞内，但目前为止。"$[水浴消化18:,，连续"次，每次收集消化对于@AB内化作用方面的研究较少。肺炎链球菌液于盛有/%!（$含/1Z小牛血清，终止消化）的离心的脂磷壁酸和磷壁酸与@AB6C结合是否也会发生管内。![/1$$=离心/$8:,，去上清，再以无菌X6“内部化”作用而进入细胞内，现在知之甚少。本研Q9,YI’液洗#次。加入含/1Z小牛血清的/%!$，混［5］匀并调整细胞浓度为#/$1究组已建立了肺炎链球菌粘附细胞的模型，为本]8S。取#8S

7、接种于直课题的进行提供了一个良好的研究平台。基于以上径为!?8的小培养皿中，"0[1Z^_#培养!5‘，更换基金项目：国家自然科学基金资助项目（"$/0$$1$）作者简介：尹一兵（/21%3），男，重庆人，教授，硕士。主要从事肺炎链球菌致病和细菌自然转化相关的分子机理研究。4-(：5%6#"6%5!51%15；7689:(：;:<:,=;:,>#/?,)?’8收稿日期：#$$"6$!6#1，修回日期：#$$!6$/6$284$微生物学报##卷!"#$培养基后继续培养。一般在第#天细胞就完2@$@（!!$$"A)*&）处理8$*67，/01洗8次后再按

8、方全融合，可以用于粘附侵袭试验。法!:8处理。观察而二者对肺炎链球菌侵袭的影!"#肺炎链球菌对活化内皮细胞侵