日本血吸虫感染小鼠肝肠组织中akp、钙化物以及pdi和atpase的表达研究

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1、分类号一』竖一一uDc⋯昼壹⋯～密级一垒立⋯．编号一⋯⋯⋯⋯十l豹大学CENTRALSOUTHUNlVERSn‘Y硕士学位论文论文题目：旦奎堡堕虫蹙鎏尘鼠跹逝组终生△墼!笾焦堑丝区￡旦亘塑鲤￡墼竺数麦鲨巫塞中南大学2012年5月硕士学位论文日本血吸虫感染小鼠肝肠组织中AKP、钙化物以及PDI和ATPase的表达研究StudyofAKPaIldCal_cif沁atiQnaswell_asPDI．and_ATPaseinLiVerandColorectuminS．。加驴D以良ⅥInfectionMice作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：

2、王芳临床医学湘雅医学院医学检验系李闻文教授论文答辩日期丛!兰：￡：!堑答辩委员会主席中南大学2012年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：曼墨日期：丝年三月二翔作者签名：型2日期：2型三年三月二翔学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：

3、学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：迎导师签名拯日期：世上月丝日中南大学硕士学位论文中文摘要摘要目的1．采用碱性磷酸酶(AKP)与钙化物染色方法，检测二者在日本血吸虫(Sj)感染小鼠吡喹酮常规治疗前后不同时间点肝脏、结肠组织虫卵的阳性水平，以期作为判别组织中虫卵死与活的标志物，为临床血吸虫病疗效

4、考察提供实验依据。2．通过检测Sj感染小鼠治疗前后肝脏、结肠组织中PDI和ATPase的表达水平，观察不同分期肝脏、结肠组织病理损害程度，以期为评估血吸虫病预后提供有效指标。方法1．建立Sj感染后和治疗后不同时间点的小鼠模型，取63只健康清洁级昆明小鼠，除正常对照组(N)9只外，其他按常规经腹部皮肤感染Sj尾蚴，感染后第45d随机分为6组：感染后45d、90d、120d三个不同时点各l组(即145d、190d、1120d)和在感染后第45d用吡喹酮300mg／kg．d×2次治疗后1M、2M和3M三个不同时点各1组(即T1M、T2M和T3M组)。

5、各模型鼠在解剖时均做灌注冲虫，查获肠系膜静脉内虫体存活情况。取各组小鼠肝脏与结肠黏膜，作冰冻切片和石蜡包埋切片。2．用偶氮偶联法和NBT／BCIP两种AKP染色方法及VONKOSSA染色法对肝肠组织切片中虫卵进行比较观察，计数显色和不显色的虫卵数，依据虫卵显色阳性率，比较分析三种染色法对血吸虫死卵和活卵鉴定的效果。3．用常规HE和Masson染色法比较观察各组小鼠肝肠组织病变差异；用免疫组化法检测各组小鼠肝和结肠病变组织中PDI与ATPase表达水平，比较分析其在肝与肠二者间的相关性以及在治疗前后的动态变化规律。结果1．各组模型鼠体内血吸虫虫体

6、检测发现：在各组感染小鼠体内均可见数量不等雌雄合抱的活虫体，在各组治疗小鼠体内则均未观察到活虫体。2．肝肠组织切片中虫卵AKP染色结果显示：在感染后45d组，两种方法检测两种切片中虫卵阳性率均在95％以上，用偶氮偶联法和NBT／BCIP两种AKP染色法及VONKOSSA染色法对肝肠组织切片中虫中南大学硕士学位论文中文摘要卵进行比较检测观察，计数显色和不显色的虫卵数，依据虫卵显色阳性率，比较分析三种染色法对血吸虫死卵和活卵鉴定的效果。感染后120d组，其阳性率显著减低，在治疗鼠中，T2M和T3M两组肠黏膜内虫卵阳性率降为O，但肝组织内仍有阳性卵，

7、并在T3M组仍有1．4％一5．29％的阳性率；AKP两种方法在检测虫卵总体效果上差异无显著性(p>O．05)，在肝和肠二者问(阳性率)呈正相关性(秩相关系数为0．876，相关系数检验p

8、为45％、95％和95％(肠)及22％、86％和96％(肝)；各组虫卵钙化率在肝和肠二者间呈正相关，(相关系数为0．841，p