非诺贝特降低ros在高糖模拟的糖尿病视网膜病变中的作用机制的研究

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1、南昌大学硕士学位论文非诺贝特降低ROS在高糖模拟的糖尿病视网膜病变中的作用机制的研究姓名：刘秋平申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：易敬林20120603摘要目的：糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病重要的并发症之一，也是致盲的主要原因之一。以往的研究发现非诺贝特(Feno)在治疗糖尿病并发症的发生发展中发挥着重要的作用，然而其详细机制尚未完全清楚，本研究主要探讨非诺贝特降低活性氧自由基(ROS)在高糖体外模拟的糖尿病视网膜病变中的作用机制。方法：采用人视网膜色素上皮细胞系(ARPEl9细胞)作为研

2、究对象，30mMD．glucose预处理ARPEl9细胞48小时，接着给予不同浓度的非诺贝特处理ARPEl9细胞16小时，5mMD-glucose加25raML—glucose作为渗透压对照组。采用ROS敏感荧光探针CM．H2DCFDA检测ROS的产生：采用Westernblot技术检测NADPH氧化酶4(Nox4)，NADPH氧化酶2(Nox2)，磷酸化低密度脂蛋白受体蛋白6(pLRP6)以及总的LRP6蛋白的表达情况：采用实时荧光定量PCR技术检测Nox4，Nox2在mRNA水平上的表达情况。结

3、果：ROS分子探针检测提示高糖明显增加了ROS的产生，非诺贝特可以显著降低ROS的产生，并且出现剂量依赖。在蛋白表达水平上观察发现高糖显著升高ARPEl9细胞中Nox4和Nox2的表达，非诺贝特处理后，明显逆转高糖的作用，降低Nox4和Nox2的表达；而在mRNA水平上也观察到高糖显著升高Nox4和Nox2的表达，同样也被非诺贝特明显减低。此外高糖显著增加pLRP6蛋白的表达，激活Wnt信号通路，非诺贝特处理后明显降低pLRP6，抑制Wnt信号通路。结论：非诺贝特通过降低高糖升高的NADPH氧化酶，

4、进而降低ROS的产生，抑制Wnt信号通路，延缓糖尿病视网膜病变发生发展。关键词：非诺贝特，活性氧自由基，氧化应激，Wnt信号通路，糖尿病视网膜病变AbstractABSTRACTPurpose：Diabeticretinopathy(DR)isoneofimportantcomplicationofdiabetes，anditisaleadingcauseoflosingvision．Manystudieshaveshownfenofibrateplayanimportantroleintreatm

5、entofthedevelopmentofdiabeticcomplications．Howevertheexactmechanismremainsunknown，thepurposeofthisstudyisfocusontheroleoffenofibratedecreasereactiveoxygenspecies(ROS)onpathogenesisofhighglucosemimicdiabeticretinopathy．Methods：Thisstudyuseahumanretinapi

6、gmentepithelialcellline，calledARPEl9．30mMD—glucose(HG)pretreatedARPEl9cellfor48hr,thentreatedWitlldifferentdosageoffenofibrateforanother16hr,5mMD·glucoseplus25mML-glucoseusedasosmoticcontr01．TheDCFmolecularprobedetectROS，westernbloaingdetectNox4，Nox2，p

7、hospho—LRP6(pLRP6)andtotalLRP6expressionlevel，QT-PCRdetectNox4andNox2mRNAlevel．Results：HGdramaticallyincreasestheROS，andfenofibratedecreaseitinadosedependantmanner．HGsignificantincreasetheNox4andNox2inbothproteinexpressionandmRNAlevel，andfenofibrateals

8、ocanreversethephenomenon，HGcansignificantincreasethepLRP6，activatedWntpathway,whichtotallyinhibitedbyfenofibrateinaconcentrationdependantmanner．Conclusions：FenofibratedecreasedtheNADPHoxidaseinducedbyHGreducedROSproduction，theninhibited