山羊dio3基因组织特异性表达及dna甲基化分析

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationTissue—specificExpressionandMethylationSignaturesoftheIodothyronineDeiodinaseType3gene(D103)inGoatsByJinPengfeiDirectedbyProf．：ZhangHongpingAssociateResearchFellow：ZhongTaoAnimalGeneticsandBreedingMole

2、cularGeneticsandGoatBreedingYa’an，Sichuan，ChinaJune，2014万方数据论文指导小组成员李利(教授)王林杰(副研究员)本论文由四川省科技支撑计划(2011NZ0099．36&2011NZ0003)、国家重点星火计划(编号2012GA810001)、国家转基因项目(2011ZX08008002)和四川省教育厅重点基金(13ZA0264)资助在四川农业大学“畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室’’完成万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在

3、导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：锄娟侈础中年红易日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保

4、存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。口本论文不保密。研究生签名：嘞哟售导师签名：衫伊加彳口本论文保密，在一年解密后适用本授权。∞2≮年‘只i9B灿q年多月。口IEI万方数据捅要D103基因在甲状腺激素代谢过程中发挥着重要的作用，它对胎儿发育、新生儿生长有着非常重要的作用，尤其对哺乳动物大脑的发育起着至关重要的作用。为了进一步理解D103基因的结构和功能，我们从南江黄羊的心肌中分离鉴定出D103基因，采用实时荧光定量PCR技术研究南江黄羊在出生后3d、3

5、0d、60d、90d和120d这5个生长阶段D103在不同组织中mRNA水平的表达差异。同时应用原位杂交技术对大脑不同区域的D103mRNA进行了定位分析；此外，采用MassArray甲基化定量检测方法对出生后3d的南江黄羊不同组织D103基因内部的CpG岛的甲基化状态进行了检测。主要结果如下：(1)克隆得到南江黄羊D103基因的编码区全序列，长度为906bp，编码的氨基酸数目为301个；山羊D103的编码序列与小鼠、大鼠、人、猪、绵羊和牛的序列相似度分别为83．61％、84．37％、88．52％、90．20％

6、、90．95％和97．46％；而D103的编码氨基酸序列与牛的同源性为98．67％，与小鼠、大鼠、绵羊、人和猪的相似度分别为89．47％、89．80％、92．36％、92．76％和93．11％。保守的TGA密码(编码硒代半胱氨酸)对催化活性是至关重要的。(2)对D103基因的生物信息学分析结果表明，D103蛋白的分子重为33．9kDa，且理论等电点为6．45。D103氨基酸包含11个磷酸化位点；二级结构预测发现山羊D103蛋白主要由0L一螺旋(41．20％)、无规卷曲(44．52％)和延伸片段(14．29％)组

7、成。进化关系分析结果表明山羊D103的核苷酸序列同绵羊和牛的亲缘关系最近，山羊D103首先与绵羊形成一支，然后再和牛、猪和犬类形成～个分支；且山羊D103与哺乳动物的亲缘关系更近，而与三斑海猪鱼和蓝刻齿雀鲷的亲缘关系要远。(3)在南江黄羊出生后的五个时期均检测到了D103mRNA的表达，但在肝、肾和背最长肌中的表达水平较高；其次为心和脑；在肺中的表达水平较低。(4)原位杂交探针成功揭示了D103mRNA在大脑不同区域的空间表达模式。在大脑皮质中，D加3mRNA在脑膜和分子层的表达十分微弱，但其中的神经纤维表达却

8、十分明显。D103转录物在脑干中的神经元和神经纤维网中广泛分布。在小脑的分子层、浦肯野细胞层和颗粒细胞层中，D103mRNA普遍呈现出中等程度的表达，但在小脑白质中呈现出极高浓度的表达。此外，在延髓中，D103mRNA的表达信号主要集中于神经纤维网。相似的，D103mRNA在下丘脑和白髓中的表达也主要分布万方数据于神经纤维网中。(5)山羊D103基因包含一个保守的CpG岛，几乎覆盖整个